Préparation Adn recombinant

[TORRM]

Bonjour!!

Quel plaisir de vous retrouvez pour l'UE11!!! (encore un grand merci pour le S1!!)

Donc au sujet de la préparation de l'ADN recombinant

On utilise toujours la même enzyme de restriction pour la digestion du vecteur et de l'insert pour avoir des coupes identiques (franc, cohésif..)
Mais il se peut qu'on se retrouve avec des coupes différentes

Ou

On se retrouve avec des coupes différentes car il n'est pas toujours possible d'utiliser la même enzyme de restriction pour le vecteur et l'insert


Merci d'avance!

[Afroblacko]

Plop
Je pencherai plutôt pour ta 2ème proposition

[Avendil]

Plop,

Moi aussi et j'ajouterai que si problème il y a ce sera au niveau de l'insert et pas du vecteur (qu'on arrive pas à utiliser l'ez de restriction souhaité).

[Azula]

Salut TORRM

Comment j'ai pu passer à côté de ton post, il est adorable

Comme Afroblacko je penche pour la seconde
La première n'a pas de sens, car une enzyme = 1 type d'extrémité généré quelque soit ce qu'elle coupe ^^

En fait la règle de base c'est d'utiliser la même enzyme de restriction sur le vecteur et l'insert de manière à générer le même type d'extrémité.
Cependant, il n'y a pas autant d'enzymes utilisables sur l'insert que sur le vecteur.
Du coup on peut "harmoniser" les bords grâce à 2 enzymes nucléase S1 ou klenow + dNTP.
Ces 2 enzymes transforment des extrémités cohésifs en extrémités franches, que ce soit du vecteur ou de l'insert.

Bonne journée et bon courage !

[TORRM]

Ok merci Azula !!!

Merci Afroblacko et Avendil également !