[News] Annathems 2013

[popsi]

Bonjour ! voici un QCM pour lequel je ne comprends pas la correction... si quelqu'un peut m'aider ça serait super cooool

QCM: dans le cadre d'une suspicion de patho monogénique, vous souhaiter rechercher la/les mutation(s) causale(s) dans le gène responsable. Concernant les techniques que vous vous pouvez être amenés à utiliser :
A)Extraction d'ADN
B)Western Blot
C) PCR-RFLP
D)PCR-Séquençage

La réponse donnée est: ACD
Ma réponse: CD
Mon raisonnement: j'ai direct pensé à la maladie de wolfram -> or dans celle ci on utilise l'ARN et non l'ADN !

Voilà merci d'avance

[Bro-06]

+1 Mais j'aurais plus mis AD puisque le PCR-RFLP si on connaît pas la mutation et qu'on se met a tester l'ADN pour chaque endonucléase en priant pour que ça marche c'est pas gagné

[Mélanie.bo]

Je pense que comme c'est "pouvez être" on doit prendre toutes les possibilités en compte donc : travailler sur de l adn ou de l arn et également la possibilité où on connaît la mutation comme pour l achondroplasie.
Après je veux pas vous dire n'importe quoi il vaut mieux attendre l avis d'un tuteur

[Chloette]

+ moi pour suivre

[popsi]

Bro-06 : il me semble que PCR-RFLP = PCR-séquençage
mélanie.bo: en fait vu que ya marqué "rechercher la mutation..." je me suis dit qu'on la connaissait pas :/

[Chloette]

Attention ! C'est bien 2 choses differente PCR sequençage et PCR -RFLP

viewtopic.php?f=605&t=67205&p=381563&hilit=PCR#p381563

[Gollum]

MESSAGE EDITE POUR LA DEUXIEME FOIS : Voir ci-dessous, réponse définitive de la prof ! Avec toutes mes excuses...

[Mélanie.bo]

Dac merci

[JD]

Coucou !

Je ne comprends pas pourquoi la A est fausse, faut bien commencer par prélever l'ADN avant de réaliser une PCR-Séquençage ?

[MissBalenciaga]

Ben en fait, d'un côté je me demande si l'item tel qu'il est posé, veut dire que : si A) est compté V : l'extraction d'ADN en elle même suffirait à identifier la mutation dans le gène.. Et là oui c'est clair que c'est F mais c'est vrai que ça parait bizarre parce que vu qu'elle demande les techniques qu'on est amené a utilisé : D'après le cours : l'extraction d'ADN est le point de départ de tous quelque soit le but.. Identifier une mutation ciblée , une mutation dans un gêne connu...

[JD]

Ouais, y'a que dans le cas d'une mutation intronique (avec apparition d'un site cryptique d'épissage) qu'on n'extrait pas l'ADN mais directement l'ARN non ?

[MissBalenciaga]

Yeap et encore dans le cas que tu cites au final on repasse par l'ADNc via la reverse transcriptase pour pouvoir faire une PCR ! Mais d'ailleurs en parlant des techniques à utiliser selon ce qu'on cherche ok dans la première ronéo elle dit qu'on peut ajouter éventuellement un séquençage pour confirmer le diagnostic d'achondroplasie mais d'après l'organigramme de Gollum , la PCR rflp suffirait .. Donc en QCM si on a Vous souhaitez identifier une mutation ciblée type n. 1138, codon 380 ,etc ... : item machin : Vous utiliserez une PCR RFLP suivi d'un séquençage à compté V ? Parce qu'après dans le cas de l'achondroplasie, le séquençage c'est vraiment pour confirmer le diagnostic étant donné qu'on risque de faire une IVG. Mais pour une autre maladie moins grave on va dire où on pourrait quand même mener à terme la grossesse : on peut s'en tenir à la PCR RFLP et basta ? Désolée du roman ^^

[popsi]

En effet ducoup je vois pas pourquoi la reponse A n'est pas juste :0

[JD]

Merci

[MissBalenciaga]

Merci Gollum oui j'espère que la prof pourra vous éclairer à temps sur ce point

[popsi]

Merci beaucoup pour t'être donné autant de mal

[Gollum]

Hello

Voici mon mail et la réponse du prof :
@MissBalenciaga +, mais pour les autres aussi qui se posaient la qst !

Dans le cas de l'Achondroplasie, nous connaissons la mutation responsable de la maladie sur le gène FGRF3.
Pour établir le diagnostic de cette maladie, nous allons réaliser une PCR-RFLP, car nous avons les enzymes de restriction spécifiques pour cette mutation.
La PCR-RFLP, est ensuite suivie d'une PCR-séquençage, afin de vérifier officiellement la séquence nucléotidique de la séquence génique mutée.

Voici la question:

Pour toutes les maladies dont les mutations sont connues, et dont le diagnostic se fait grâce à la PCR-RFLP (dans le cas où des enzymes de restriction spéciales existent), est-il obligatoire de réaliser une PCR-séquençage de vérification à chaque fois?
ou ce cas n'est-il retrouvé que dans le cadre de l'achondroplasie car c'est une maladie grave et qu'il est important de réaliser un diagnostic certain?

Merci d'avance pour votre réponse !

Bonsoir,

En diagnostic, quelque soit la mutation mise en évidence on doit toujours confirmer sa présence par une 2ème expérience. Idélaement, il faut un nouveau prélèvement pour refaire l'extraction d'ADN et la recherche de la mutation. A défaut d'avoir un nouveau prélèvement on refait une extraction d'ADN génomique et si possible on confirme avec une autre technique. Dans l'exemple de l'achondroplasie, on confirme la manip de PCR-RFLP par une manip de PCR-séquençage.
Dans le cas où le diagnostic est fait en PCR-séquençage on refait une manip de PCR-séquençage mais avec d'autres primers.
Ce qu'il faut retenir c'est que la présence de la mutation (quelque soit la pathologie) doit toujours être confirmée par une seconde expérience.

Bonne révision
Cordialement

Sylvie Bannwarth

Bon courage !!!

[JD]

Ca reste ambigue sachant qu'elle considère, dans les exercices avec le schéma d'une migration par PCR-RFLP, qu'on peut confirmer le diagnostic de l'achondroplasie et compter juste un item type comme ça :p

Merci en tout cas

[Gollum]

Salut à vous tous !

Je fais un plus gros message ici parce que c'est de ce post que tout part ...lol !
Je suis désolée , mais en fait la réponse à ce qcm n'est pas D mais bien AD comme vous le pensiez pour la plupart d'entre vous au début!

J'avais demandé une nouvelle fois à la prof parce que je savais que ca ne vous convenait pas et à moi non plus et voici sa réponse:

DESOLEE JE VOUS AI REPONDU SUR LE CHOIX ENTRE PCR-RFLP ET PCR-SEQUENCAGE MAIS EFFECTIVEMENT TOUTES LES BONNES REPONSES CONCERNANT CE QCM SONT A ET D. EN EFFET IL FAUT FORCEMENT UNE EXTRACTION D'ADN GENOMIQUE POUR POUVOIR REALISER LA PCR-SEQ
DESOLEE POUR LA CONFUSION !!!!!

CORDIALEMENT

viewtopic.php?f=605&t=63717

Je suis vraiment désolée encore une fois! mais au moins vous êtes surs cette fois ! Faites tourner cette info quand vous la voyez!!
BON COURAGE A VOUS TOUS, JE VOUS EN ENVOIE PLEIN !!!
Peace & Love

[popsi]

Merci pour tout le mal que tu te donnes