Intégration au hasard et ciblée

[sansa]

Salut


Je n'ai pas tellement compris la nuance entre ces deux méthodes, si vous pouviez m'éclairer là dessus s'il vous plait

[luciférase]

Coucou

Alors il me semble que pour l'intégration au hasard, ton gène va être inséré dans le génome de manière aléatoire, c'est à dire n'importe où : il n'est pas séquence spécifique. L'inconvéniant c'est que du coup on contrôle pas son emplacement dans l'ADN, et il peut aller se mettre dans un endroit où on a un gène qui est vraiment important, et du coup il va altérer la fonction de ce gène-là. Mais c'est plus à facile à faire que l'intégration ciblée.

L'intégration ciblée ça permet de faire rentrer ton gène d'intérêt dans un endroit bien précis de l'ADN : il se met pas dans un endroit au hasard, et pour faire ça on encadre le gène qu'on veut insérer de petites séquences bien spécifiques, qui vont reconnaitre par complémentarité des bases la séquence d'ADN qui correspond à l'endroit où tu veux que ton gène s'insère. Pour aider l'intégration tu peux aussi ajouter des enzymes. L'avantage c'est que tu pourras contrôler l'insertion, et éviter que ton gène aille se mettre dans un endroit gênant pour l'expression d'autres gènes importants.

Je crois que c'est ça, on verra l'avis d'un tuteur !

[sansa]

Déjà merci beaucoup luciférase !


Ca m'aide à comprendre mais il y a des choses que j'ai du mal à saisir:
par exemple pour le KO, on introduit le gène de manière ciblée mais pourtant on attend de rares cas de recombinaisons homologues

Déjà ça je trouve ça étrange et dans le cas de:

l'intégration non ciblée (transgénèse) on a aussi de rares cas de recombinaisons j'ai vraiment du mal à saisir

[luciférase]

Je pense que peu importe si tu fais une intégration ciblée ou au hasard, le fait que le gène s'intègre dans ton génome reste un événement assez rare.

- Si tu fais une intégration au hasard, dans de rares cas ton gène s'insère mais n'importe où dans l'ADN
- Si tu fais une intégration ciblée, dans de rares cas ton gènes s'insère mais à l'endroit bien précis où tu voulais le mettre

Donc ta recombinaison, soit t'as de la chance et elle se fait, soit (dans la plupart des cas) elle se fait pas, mais tu peux choisir de la faire soit au hasard soit de manière ciblée. Après intégration (=recombinaison) ou pas dans l'ADN, c'est une question de chance

Après je suis pas sûre sûre c'est mieux d'attendre un tuteur

[sansa]

Merciii 1000 fois

[sansa]

Mais d'après toi, même s'il n'est pas inséré il s'exprime transitoirement non ?

Puis s'il s'insère alors là c'est une expression chronique

[luciférase]

La plupart du temps il va disparaitre au bout de quelques divisions donc c'est compliqué de travailler dessus. Mais oui, des fois il peut s'exprimer transitoirement donc on va pouvoir l'étudier un petit peu pendant quelques jours
Et rarement il peut y avoir recombinaison on peut dire qu'il est intégré dans le génome de la cellule, donc le gène va être stable et sera exprimé durablement !