KO

[chamou12]

Coucou la biocell!

Alors, j'aurais voulu être éclairée sur ces points:

Pour le Knock OUT, lorsqu'on insère la casette, insère-t-on aussi un promoteur ou non? J'aurai tendance à dire oui ?
Ensuite, pour le KD, la portion d'ADN intégrée dans le noyau nécessite effectivement un promoteur?
Et pareil aussi pour le KO?

En fait, je me suis rendue compte que je ne comprenais pas la phrase "on rajoute un promoteur pour insérer les choses directement dans le contexte. On aura ainsi le même niveau d'expression que le niveau naturel"

Parce que, dans tous les cas, il faut ajouter un promoteur au gène pour qu'il soit traduit non?
Pour exemple, avec le KO, on insère une cassette à la place avec un codon stop et un gène de résistance, mais s'il n'yavait pas eu de promoteur propre à ce gène, comment on aurait fait?

Merci de votre aide .

[chamou12]

Up?

[schildpad]

salut,
l'ajout du promoteur ne concerne seulement le KI, pas le KO ni le KD
Pour le KI la finalité différente du KO, on veut que le gène s’exprime pour pouvoir tracer son expression ou tracer son produit, donc on ajoute à la cassette un promoteur (indispensable à la transcription du gène => donc inutile pour le KO et pour le KD) => pour insérer le gène directement dans le contexte (transcritptionnel, d'expression) de la cellule. On aura ainsi une expression qui aura le même niveau que le niveau naturel(si la cellule l'avait exprimé toute seule), qui va avoir aussi la même répartition dans les tissus que la répartition naturelle.
KO : On veut tuer l’expression du gène X, j’y intègre une cassette composée de : 2 séquences homologues au séquences entourant le gène cible avec au milieu non pas la réelle séquence du gène mais un codon stop et un gène de résistance à la puromycine.
sur la photo du diapo, on peut voir que ton ajoute le promoteur uniquement pour le KI: