NGS simple/double brin

[gumpel]

Coucou, je voulais avoir une précision sur les étapes de la NGS:

-Quand on sélectionne nos régions d'intérêts grâce au complexe (biotine/strepta), il est marqué dans la ronéo de l'an passé que l'on dénature notre ADN double brin, on se retrouve donc plus qu'à un seul brin.
Cependant par la suite on fait notre PCR émulsion, et il est marqué que l'on passe par les étapes d'une PCR classique mais on est d'accord que pour la première réplication on a pas besoin de séparer nos deux brins étant donné que comme vu précédemment ils sont déjà simple brin ? (je m'avance sur des petits pièges tutoresques )

J'espère que j'ai été clair haha.... merci d'avance

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Tu es effectivement obligé de dénaturer l'ADN double brin pour pouvoir utiliser tes sondes de capture biotinylées

Du coup en effet, lorsqu'on dégrade ces sondes l'ADN se retrouve bien toujours simple brin lorsqu'il est incorporé dans un microréacteur, ce qui fait que la première étape de dénaturation de la première PCR n'a techniquement pas lieu

Cela dit, retiens vraiment dans le cadre du cours que l'on retrouve lors d'une PCR en émulsion les mêmes étapes qu'une PCR classique, si tu restes fixé sur cette particularité tu risques d'être induit en erreur...

Je te rassure tu n'auras pas ce genre de pièges au tutorat, c'est beaucoup trop tordu et litigieux, et ça ne présente aucun intérêt de vous piéger là-dessus, d'autant plus que ce que la prof veut que vous reteniez c'est vraiment qu'on retrouve toutes les étapes d'une PCR classique, y compris la dénaturation !

Mais sois sans crainte, il y aura sans aucun doute bien d'autres pièges tout aussi vicieux qu'incontestables au tutorat, on est déjà sur le coup

[gumpel]

Niquel Merci pour la réponse dotée d'une rapidité sans nom !! Je comprends bien c'était aussi par soucis de compréhension pour la suite du processus!
En attente de pièges vicieux alors haha ! bonne soirée !