Séquencage haut débit

[lélé99]

salut
A propos du Séquencage haut débit
après l'étape d'isolement , on doit séparer nos séquences d'intérêt avant de faire la PCR mais
je ne comprends pas comment on peut le faire ..?
Merci

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Je ne comprend pas trop ta question, tu te prends la tête pour rien j'ai l'impression

Tes sondes de capture biotinylées s'apparient avec la région d'intérêt que tu veux séquencer. Puis des billes magnétiques recouvertes de streptavidine vont pouvoir s'apparier, s'attacher avec nos sondes de capture, et on va pouvoir récupérer le tout grâce à un aimant (puisque nos fameuses billes sont magnétiques )
Une fois qu'on est sûrs qu'il n'y a plus dans notre éprouvette que des fragments d'ADN qui nous intéressent après plusieurs élutions (c'est-à-dire plusieurs lavages) on va vouloir les séquencer, on va donc devoir faire une PCR en émulsion

Mais alors Jamy, c'est quoi une émulsion ?
En gros c'est comme si on mélangeait de l'eau et de l'huile pour former des gouttelettes d'huile #mayonnaise
Chaque gouttelette d'huile correspond à un microréacteur, et on s'arrange toujours pour que chaque gouttelette, c'est-à-dire chaque microréacteur, ne contienne qu'un seul fragment d'ADN !

Quand on te dit "on s'arrange pour que" ça veut dire "c'est comme ça que ça marche on s'en fout de savoir précisément comme on sépare nos fragments"
Si tu veux on va venir "pêcher" nos fragments un par un avec une micropipette et on va les injecter chacun dans un microréacteur différent (on s'en fiche de savoir lequel est où puisque de toute façon ils sont marqués par des barres codes spécifiques du patient donc on pourra toujours les retrouver )

C'est vraiment un détail sans importance qui ne doit pas te perturber, dis-toi que les techniques telles qu'elles sont utilisées dans la pratique courante sont beaucoup plus complexes que ce qui est dit dans le cadre du cours et toute simplification est bonne à prendre, ce qui intéresse les profs sur cette partie n'est pas que tu saches comment faire pour qu'un seul fragment se retrouve dans un seul microréacteur
En revanche c'est très important de savoir qu'il ne doit y avoir qu'un seul fragment par gouttelette, peu importe comment on fait !

C'est bon ?