Hey !
Ta question correspond exactement à l'introduction de 20 minutes du cours 2 de la Tut' Rentrée
D'ailleurs je ne sais pas si tu as pensé à regarder les fiches de notre centre de téléchargement ça pourra peut-être t'aider ! (je ne sais pas qui les a faites mais il paraît qu'elles sont top
)
En fait le séquençage ne nous permet de séquencer que les exons, jamais les introns !
Or là un séquençage des exons ne permet de trouver qu'une seule mutation, comme le syndrome de Wolfram est récessif et que les enfants sont atteints il y a forcément une deuxième mutation au niveau des introns (puisqu'il n'y avait rien dans les exons
)
On suspecte donc un variant d'épissage, à partir de là on a deux façons de vérifier notre théorie :
- Soit on séquence tout le gène, ça marcherait mais ce serait long et peu efficace, il y a plus subtil à faire que cette méthode bourrin (parce que oui on est très subtils nous en Biomol
)
- L'autre solution est de partir de l'ARNm et de résonner à l'envers !
Sauf que de base on ne peut pas travailler avec de l'ARN, c'est instable et on ne peut pas faire de PCR avec.
On va donc s'arranger pour transformer notre ARN en ADN, c'est uniquement ça le rôle de la reverse transcriptase elle ne retrouve aucune séquence intronique, dis toi que c'est une enzyme avec le QI d'une moule elle fait juste ce qu'on lui dit de faire, on lui donne un ARNm et elle sans réfléchir elle le transforme en ADN complémentaire (qui est un ADN simple brin complémentaire de la séquence de l'ARNm dont il est issu, d'où son nom...)
On a donc notre ADN qui correspond à toute la séquence du gène qui a été transcrite et épissée (les exons) mais qui contient aussi la portion intronique qui a été transcrite et qui est restée après l'épissage à cause justement du variant d'épissage ! Les autres introns ont étés épissés normalement ils ne sont donc pas présents dans l'ARNm et ne seront donc pas non plus dans l'ADNc qui provient de ce même ARNm !
L'ARNm ne contient aucun introns sauf celui qui a été en partie transcrit à cause du variant d'épissage !
C'est d'ailleurs vérifié car quand on fait migrer sur gel le variant avec l'allèle non muté, on voit que le variant migre moins loin car il est plus lourd, sa séquence est donc plus longue à cause de la portion intronique qui a été transcrite et qui est restée après l'épissage alors qu'elle n'aurait pas dû !
Tout ce résonnement est sur la fiche avec des schémas en plus si mon explication n'est pas suffisamment claire
C'est bon ou tu bloques encore ?
