Hey !
En effet il est assez fourni, j'espère que tu fais tous les DM bien sûr
Alors c'est une différence fondamentale entre le séquençage et la PCR, et c'est tout à fait logique dans la mesure où ces deux techniques n'ont pas du tout le même objectif !
1) Le séquençage (quelque soit la méthode utilisée) a pour but de déterminer la succession de nucléotides d'un fragment d'ADN.
On n'utilise qu'une seule des deux amorces du produit de PCR qu'on veut séquencer.
Il ne faut pas avoir les deux amorces "sens" et "anti-sens" à passer ensemble dans le séquenceur, ce qui donnerait un électrophorégramme illisible: on lirait une même séquence simultanément dans les deux sens opposés, il y aurait ainsi une superposition du signal (un peu comme dans le cas où on a un variant d'épissage quand on veut diagnostiquer un syndrome de Wolfram si tu veux, là il y aurait deux pics superposés pour chaque position nucléotidique, sur l'ensemble de la séquence donc, et on ne pourrait rien interpréter)
On n'utilise donc qu'une seule amorce pour lire la séquence une seule fois !
2) La PCR a pour but d'amplifier de l'ADN.
MAIS on ne veut pas amplifier tout un fragment, c'est la notion capitale à comprendre qui fait qu'on a besoin de deux amorces !
En effet on veut amplifier une région spécifique d'ADN c'est là tout l'intérêt de la PCR !
On va donc encadrer la position de la mutation que l'on recherche par deux amorces/primers afin de n'amplifier que l'a portion de nucléotides autour (les autres portions du fragments ne nous intéressent pas puisque ce n'est pas là qu'on va trouver la mutation si elle est présente)
L' utilisation d'une amorce "sens" et "anti-sens" permettent donc de définir la séquence de l'amplicon !
Si tu n'avais qu'une amorce tu pourrais certes amplifier ton fragment mais tu l'amplifierais intégralement ce qui ne t'intéresse pas, tu ne veux amplifier que la portion qui t'intéresse d'où l'intérêt de mettre deux amorces, l'une pour dire à la polymérase "commence ta réplication ici la séquence qui nous intéresse est juste après" et une autre pour dire "pas la peine d'aller plus loin tu as terminé de répliquer la séquence qui nous intéresse"
(bon en vrai c'est beaucoup plus compliqué, le primer anti-sens n'est pas une borne de terminaison mais vois-le comme ça tu vas t'embrouiller plus qu'autre chose sinon, la PCR génère des fragments de taille légèrement différente au cours des différents cycles par des réactions "croisées" que la prof n'aborde pas, retiens vraiment que les deux amorces encadrent la portion qui nous intéresse, l'une dit où commencer et l'autre où terminer la réplication, et on n'a pas de brouillage du signal car contrairement au séquençage on ne détermine pas la nature des bases on se contente d'amplifier une région spécifique de matériel génétique)
Pour ce qui est du schéma n'oublie pas que seul les brins matrice sont représentés, les brins fils antiparallèles ne sont pas visibles, les amorces sont donc en face des extrémités 3' du brin matrice et la flèche regarde vers l'extrémité 5' de ce même brin matrice, mais cette flèche va devenir après élongation le brin fils nouvellement synthétisé qui est ANTIPARALLÈLE !
La flèche est donc bien au niveau l'extrémité 5' de ce brin non représenté, et elle pointe bien en direction de sa future extrémité 3' !
Est-ce que c'est clair ?
.