Hey !
Non c'est bien l'extrémité 5' !
En fait quand tu synthétises le dernier fragment qui lui seul peut s'apparier à la sphère, il est biotinylé en 5 ' et son extrémité 3' s'apparie par complémentarité avec le primer situé sur la sphère.
Ensuite tu synthétises le brin complémentaire à partir de ce primer de 5' en 3', mais l'extrémité 3' de ce brin fils nouvellement synthétisé à partir du primer fixé à la sphère ne possède pas de biotine !
En fait il manque un info importante dans la ronéo que j'ai jugé bon de rajouter sur la fiche, c'est que l'extrémité 5' de tous nos fragments
double brin rattachés à la sphère est biotinylée !
En gros ce n'est pas l'extrémité opposée à la sphère
du seul brin issu du primer de ladite sphère qui est biotinylée (auquel cas la seule possibilité aurait effectivement été son extrémité 3' pour la raison que tu as évoquée), c'est l'extrémité opposée à la sphère de
l'ensemble de la double hélice, dont l'un des brins est effectivement issu d'un primer de la sphère, qui est biotinylée !
Il faut considérer la double hélice dans sa globalité en associant les deux brins et non pas uniquement le brin attaché à la sphère les deux fonctionnent en complémentarité ! Le brin non attaché à la sphère fournit la biotine nécessaire à l'étape de purification, son brin complémentaire permet de rattacher la double hélice à la sphère ce qui permet un séquençage plus efficace par la suite !
En d'autres termes, la biotine est située uniquement sur l'extrémité 5' du brin complémentaire à celui fixé aux primers de la sphère ! L'extrémité 3' de ce brin n'a pas de biotine, et son extrémité 5' est attachée à la sphère
Justement lors de l'étape suivante de séquençage individuel des sphères, la dénaturation va libérer le brin biotinylé en 5' qui ne sert pas pour le séquençage, afin de ne garder que le brin non biotinylé fixé à la sphère !
On hybride ensuite une amorce complémentaire du primer A sur l'extrémité 3' du brin non biotinylée !
Je t'ai trouvé un schéma où tu peux voir que l'extrémité 3' du brin fixé à la sphère n'est pas biotinylée !
On peut voir sur les schémas de la prof une bille de biotine à l'extrémité 3' des brins lors de l'étape de séquençage mais c'est une erreur, elle a repris les schémas de l'étape précédente, il n'y a plus besoin de biotine à ce stade car on a déjà purifié nos sphères !
C'est justement pour ça que les schémas du cours devraient changer cette année, ils manquaient de clartés sur certains points et de précisions sur le fait que l'ADN est simple ou double brin à telle ou telle étape !
Ne te prends pas la tête avec ces détails, ce n'est pas vraiment ce qui intéresse la prof que de savoir quelle extrémité est biotinylée, fie toi au texte de la ronéo ou à la fiche il n'y a pas d'errata normalement ! (il suffit que j'écrive ça pour que quelqu'un en trouve un
)
Est-ce que c'est bon ?
