Bonjour,
Air-Max29 a écrit:Salut !
Je comprend pas trop en quoi la technique du double marquage permet de différencier les cellules apopototiques et nécrotiques. En fait j'ai compris qu'avec l'iodure de propidium on peut différencier apoptose et nécrose via la perméabilité de la cellule nécrotique, mais avec l'annexine 5 c'est plus flou pour moi.
Est-ce que c'est une question de localisation, genre comme la phophatidylsérine est "floppé" pendant l'apoptose alors on aura l'annexine 5 juste au niveau de la membrane, et à l'inverse dans toute la cellule nécrosée qui aura explosé ?
Merci d'avance !
Alors je reprends tout depuis le début.
On a
2 techniques différentes dans le double marquage pour différencier les cellules nécrotiques des cellules apoptotiques.
La
1ere technique utilise les propriétés physiques des cellules à être perméable ou non à certains colorants de l'ADN (Hoescht ou iodure de propidium) en l'absence de fixation de ces cellules.
Tout d'abord, on voit que, lorsqu'on augmente la quantité d'Hoesht (axe des ordonnées du graphique), on voit bien des petits points noirs au plus haut de l'ordonnée de part et d'autre de la ligne (ce sont les cellules qui ont fixées le plus d'Hoescht). Cela s'explique par le fait que l'Hoesht ne nécessite pas que la cellule soit perméabilisée pour agir au niveau de l'ADN, donc l'Hoesht permet de marquer autant les cellules apoptotiques que les cellules nécrotiques.
Dans cette technique la distinction sera faite grâce à l'iodure de propidium, qui lui va agir uniquement si la cellule est perméabilisée. Donc, quand on augmente la quantité d'iodure de propidium (axe des abscisses du graphique) on aura uniquement les cellules nécrotiques qui seront marquées, car ce sont elles qui fixeront la plus grande quantité d'iodure de propidium. Contrairement aux cellules apoptotiques qui ne fixe pas l'iodure de propidium en absence de fixation.
La
2eme technique utilise les propriétés membranaires des cellules, plus précisément la localisation de la phosphatidylsérine (PS), un phospholipide exposé à l'intérieur de la bi-couche membranaire d'une cellule normale.
Tout d'abord, lorsqu'on augmente la quantité d'annexine V, un marqueur de la PS, on voit qu'autant les cellules nécrotiques qu'apoptotiques sont marquées. Car, pour les cellules apoptotiques, il y a une externalisation physiologique de leurs PS et pour les cellules nécrotiques, une libération des PS à l'extérieur du fait de l'explosion de celles-ci.
Dans cette technique la distinction sera fait grâce à l'iodure de propidium également, comme ci-dessus. Le résultat est que lorsqu'on augmente la quantité d'iodure de propidium (axe des ordonnées), seul les cellules nécrotiques pourront en fixer et ça se verra sur le graphique par cytométrie.
Air-Max29 a écrit:Et pour le pic sub-G1 est-ce que c'est bien uniquement pour différencier une cellule apoptotique d'une cellule encore active ?
Oui c'est bien ça
Voilà, j'espère que c'est plus clair pour toi, n'hésite pas si tu as d'autre questions, désolé du temps d'attente, ça se reproduira plus, bon courage pour la suite
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