Mort cellulaire, cytométrie de flux

[widedost]

Bonjour !

Dans la ronéo de l'année dernière, sur les tests de reconnaissance des cellules nécrotiques et apoptotiques (p14), il est écrit qu'on ne perméabilise pas les cellules et qu'on ne les fixe pas non plus, je voulais savoir pourquoi ? enfin qu'est ce que ça veut dire concrètement

Et 2ème question toujours par rapport à ça, est ce que l'ordre des colorants compte ? par exemple dans la cytométrie de flux, est ce qu'on doit obligatoirement mettre l'Hoescht puis l'iodure, ou l'annexine 5 puis l'iodure ?
Parce qu'il est écrit que vu que les membranes sont déjà compromises, l'iodure peut aller marquer l'ADN directement, ça veut dire qu'il faut toujours un premier colorant avant l'iodure qui compromette les membranes non? Sinon elle aurait pas d'effet ?

j'espère que je suis claire , et merciiii

[yaya06]

Bonjour,

Dans la ronéo de l'année dernière, sur les tests de reconnaissance des cellules nécrotiques et apoptotiques (p14), il est écrit qu'on ne perméabilise pas les cellules et qu'on ne les fixe pas non plus, je voulais savoir pourquoi ? enfin qu'est ce que ça veut dire concrètement

En clair, dire qu'on ne perméabilise pas les cellules et qu'on ne les fixe pas non plus, ça veut dire que celles-ci sont distinguables vis à vis de certains colorants à l'ADN, tel que l'iodure de propidium qui comme on l'indique dans le cours, nécessite la perméabilisation des membranes pour passer (en gros il a besoin d'espace dans les membranes pour passer).

Si les cellules étaient perméabilisées, les tests nécessitant l'iodure de propidium seraient inutiles car, autant les cellules nécrotiques (où les cellules ont explosées et leurs contenu a été libéré) ou les cellules apoptotiques, seraient marquées positivement à l'iodure.

La non perméabilisation permet donc de garder cette distinction pour le marquage de différents types de cellules.

Et 2ème question toujours par rapport à ça, est ce que l'ordre des colorants compte ? par exemple dans la cytométrie de flux, est ce qu'on doit obligatoirement mettre l'Hoescht puis l'iodure, ou l'annexine 5 puis l'iodure ?
Parce qu'il est écrit que vu que les membranes sont déjà compromises, l'iodure peut aller marquer l'ADN directement, ça veut dire qu'il faut toujours un premier colorant avant l'iodure qui compromette les membranes non? Sinon elle aurait pas d'effet ?
i

Non, ça ne compte pas.
Ce ne sont pas les colorants qui font que les cellules sont perméables ou non, ce ne sont que des marqueurs.
Justement, c'est ce qu'on a dit plus tôt sur la permabilisation qui compromet ou non les membranes (en plus de si elles ont compromises naturellement ou non)

Bon j'espère que ces explications sont assez compréhensibles pour toi, n'hésite pas si t'as des questions supplémentaires, bon courage pour la suite !

[widedost]

D'accord merci pour tout !!