NGS et Sanger

[eslem.elbatti]

Bonjour,

J'ai deux question à propos du cours sur la méthode d'étude de la cellule :
- Premièrement concernant le NGS : quand on dit qu'une machine à 300 lectures sa veut dire qu'elle peut lire 300 nucléotides par morceau
d'ADN donné?
- Deuxièmement, j'ai compris la technique de SAnger (comment on procède) mais je n'ai par contre par compris à partir du moment où on
met ce que l'on a obtenue sur un gel.

Merci d'avance

[Starman]

Salut
- D'abord 330 nt de lecture ça veut dire qu'en un tour de machine (en un "run") tu peux lire une séquence de 330 nucléotides.

- Ensuite en fait tu as du comprendre que quand tu récupères les morceaux que tu as séquencé, tu te retrouves avec des séquences petites (qui ont incorporé tôt le ddNTP) et des séquences longues (qui ont incorporé tard leur ddNTP). Du coup tu vas mettre chacun des contenus de tes 4 tubes dans 4 puits d'électrophorèse (tu as donc un puits A, un puits T, un puits C et un puits G) et tu fais migrer. Les séquences les plus longues vont le moins migrer et les séquences les plus courtes vont le plus migrer. Tu te retrouves donc avec ça:

images.jpg (6.51 Kio) Vu 153 fois

Et de ce genre d'images tu déduit la suite de nucléotides. Après dis toi que le séquençage c'est pas la partie la plus importante du programme et c'est pas grave si tu comprends pas dans le détail.