Marquage à l’iodure de propidium et à l’annexine V

[alizee26]

Bonjour je n’arrive pas à lire correctement les graphiques qui représentent les résultats des expériences de marquage fluorescent (ronéo de l’année dernière) pouvez-vous m’aider ? Celui avec hoescht/iodure de propidium et annexine-V/iodure de propidium

[Kanye Western-Blot]

Hello !

C'est une question un peu vague mais je vais tâcher de reprendre le tout.

C'est une technique qui va te permettre d'identifier des cellules apoptotiques et nécrotiques.

Comment ça marche ?

Pour la technique de Hoescht/Iodure de Propidium, tu vas avoir plein de cellules dans un milieu. Toutes les cellules incorporent le Hoescht (peu importe qu'elles soient normales, apoptotiques ou nécrotiques). Cependant, seules les cellules NÉCROTIQUES incorporeront l'iodure de propidium, car l'iodure de propidium est une substance qui ne peut pas traverser les membranes. Or les cellules nécrotiques n'ont plus vraiment de membrane puisqu'elles explosent.

Du coup toutes les cellules qui sont entourées en bleu sur la figure sont des cellules nécrotiques, car tu vois bien qu'elles se situent à des concentration d'iodure de propidium élevé, vers la droite de la figure (la concentration d'iodure de propidium étant consignée sur l'axe des abscisses !)

Pour ce qui est du marquage à l'annexineV/iodure de propidium, c'est exactement pareil. À la différence près que l'annexine V ne va pas marquer toutes les cellules comme l'Hoescht, mais va uniquement marquer les cellules apoptotiques et nécrotiques. L'iodure de propidium quant à lui va uniquement marquer les cellules nécrotiques.

Du coup sur le schéma tu observes bien que les cellules entourées en bleues seront nécrotiques (car elles sont situées en haut, et cette fois-ci, la concentration d'iodure de propidium est consigné en ordonnée), alors que tes cellules qui seront en bas à droite (entourées en rouge) seront tes cellules apoptotiques !

C'est plus clair pour toi ?

[alizee26]

D’accord j’ai beaucoup mieux compris merci 😊 tes explications sont toujours top