Expérience concours 2017/2018

[Mew]

Bonjour !

C'est à propos de l'expérience ci-dessous, j'ai trouvé des corrections totalement différentes et je ne comprends pas celle de la correction officieuse qui n'est pas détaillée.. J'ai un soucis plus particulièrement avec les QCM et items suivants : 9 item C, 10 (et donc la lecture de l'immunoblot en figure 2), 11 item A, 12 items C et D, 13 items A et D.

Merci de votre aide !

[Kanye Western-Blot]

Helloooo ! Alors go répondre à ta longue questiooon (ça m'a pris une heure et demie mdrrr)

--> Item 9C: je le compte faux, ainsi que mes co-tuts et mes vieux pour la raison suivante: FAUX: Nécessaire oui, parce qu’on voit dans les pistes où il n’est pas présent il n’y a pas d’interaction … Suffisant en revanche non. Rien ne montre qu’il est suffisant, et la piste FL semble prouver le contraire, en effet, on voit que la trace n’est pas aussi marquée que les autres, cela impliquerait qu’il y aurait d’autres éléments qui régulent l’interaction entre les 2 protéines !

--> QCM 10: Tu fais une immunoprécipitation, c'est à dire que tu vas garder uniquement les molécules en interaction avec l'anticorps que tu utilises (cf. chapitre sur les méthodes d'études de la cellule si tu te ne souviens pas).
L'item A est faux car tu ne montres pas que p53 ne s'exprime pas en présence d'IgG, juste que p53 n'interagit pas avec ces IgG à la limite ... p53 s'exprime quoi qu'il arrive, avec ou sans IgG +++
B est faux car on ne montre par que p53 interagit avec TSPYL5 car même sans présence de TPSYL5 (la 4ème colonne) il y a quand même présence de TSPYL5, rien ne nous montre donc une interaction entre les 2 (il faudrait réaliser d'autres expériences)
C est VRAI car on voit bien que quand on fait une immunoprécipitation au FLAG (qui devrait donc éliminer toute trace de Myc-USP7) on a quand même une trace de Myc-USP7 (4ème colonne encore) ! Qu'est-ce que cela veut dire dans une iummunoprécipitation ? Ca veut dire qu'il y a une interaction entre tes 2 protéines, cette interaction se traduit par le fait que les 2 protéines soient "collées" et que quand on fait l'immunoprécipitation sur l'une des deux protéines, l'autre apparaitra aussii.
La réponse D est vrai aussi, on voit dans la 4ème colonne qu'il y a une interaction entre FLAG-Myc et Flag-p53 (or cette colonne est sans TSPYL5). En revanche quand on prend la même disposition mais en rajoutant du TSPYL5, on voit qu'il n'y a plus d'interaction ! (plus de trace de Myc-USP7) donc on peut en conclure un effet inhibiteur !

--> Pour l'item 11A c'est tout bête ! Quand tu regardes les graduations sur le côté, tu vois que plus ça migre haut plus ta protéine p53 est lourde. Ici on nous dit dans ton énoncé qu'on a un inhibiteur de protéasome --> cela implique que même si tes protéines seront poly-ubiquitinées elles ne seront pas éliminées par le protéasome, donc tu pourras observer des protéines poly-ubiquitinées non dégradées. Ici pourquoi peut on être sûr que les protéines de haut poids moléculaires sont les formes poly-ubiquitinées de p53 ? Parce que rajouter des groupements ubiquitines fait augmenter le poids moléculaire est le seul moyen logique pour que p53 puisse augmenter de poids moléculaire est qu'on lui rajoute de l'ubiquitine pour l'éliminer.

--> Item 12C: c'est vrai on ne peut pas l'exclure, pourquoi ? Tout simplement parcequ'on a pas de piste avec USP7 seul ! On a seulement une piste avec USP7 et MDM2 et USP7, MDM2 et TSPYL5, on ne peut donc pas conclure sur l'effet d'USP7 SEUL sur p53
Item 12D: On a trop peu de données pour prouver cela ... Déterminer un rôle d'une protéine juste avec cette expérience ce n'est pas suffisant, il faudrait d'autres expériences et même une piste avec TSPYL5 SEUL notamment +++

--> Item 13A: Ça pour le coup c'est tout bête et c'est du cours tout simplement ! Le rôles des ARNintereférents (siUSP7 ici) est de dégrader la protéine en question (cf partie sur le knock-down dans le cours sur méthode d'études de la cellule)
Item 13D: Il suffit de comparer une situation où on a flag-TSPYL5 avec et sans USP7 ! Or c'est le cas ici, dans la 3ème et 4ème colonne on a flag-TSPYL5 avec et sans USP7, on regarde dans la ligne de p53 et on voit effectivement que suivant s'il y a présence d'USP7 ou non il y aura soit pas de trace ou soit une trace de p53 !

Voilà j'espère avoir tout répondu !

[Mew]

Rebonjour !

C'est beaucoup plus clair maintenant j'ai tout compris !
Merci beaucoup pour cette réponse si rapide et détaillée ainsi que ta patience et ton implication !

[BatBouut]

salut

QCM 11 : AD A) Vrai B) Faux Les ubiquitines sont fixés par liaison covalente C) Faux D) Vrai E) Faux

comment on sait que Les ubiquitines sont fixés par liaison covalente ?
Et aussi sur la figure 3, c’est quoi la différence entre ( IP: P53 ) et ( WB : p53 ) ? Je pensais que c’est la même chose..

merci d'avance

OUMI tu peut ouvrir le poste pour que le tuteur puisse voir stp ? mercii

[JuicyGlucose]

Salut,

C'est dans la ronéo 6 p.15 (de cette année) : "cette enzyme de conjugaison [...], va transférer l'ubiquitine activée sur la protéine par liaison covalente". Je crois que c'est juste du cours en fait.

Voilà j'espère que ça t'aidera le temps qu'un tuteur confirme.

[Kanye Western-Blot]

Helloo

Oui effectivement comme JuicyGlucose l'a dit c'est bien du cours, l'ubiquitination se fait via liaison covalente (viens me remplacer en tuteurs des fois Juicy j'en aurais besoin en ce moment ) !

Pour ce qui est de la figure 3, oui ici on dit juste qu'on a immunoprécipité p53 (donc IP: p53) et ensuite on l'a mis sur gel et on a réalisé un WB pour l'observer (donc WB: p53). Donc en soit ce n'est pas "pareil" parce que l'IP et le WB ce sont 2 techniques distinctes, mais là en l'occurence dans cette figure on s'en fiche un peu !

C'est bon pour toi ?

[JuicyGlucose]

Oui effectivement comme JuicyGlucose l'a dit c'est bien du cours, l'ubiquitination se fait via liaison covalente (viens me remplacer en tuteurs des fois Juicy j'en aurais besoin en ce moment ) !

Mdrr tqt ce serait un privilège, et même pourquoi pas prendre ta place l'an prochain, au final c'st pas si mal la biocell
La biocell et moi on ne fait plus qu'un (moi qui détestais ça au début mdr...)

[BatBouut]

c'est tout bon pour moi, merci à vous