PCR classique enzymes

[Verveine]

Salut !!!
Dans le cas du syndrome de Wolfram, quand on fait une PCR du père pour trouver la mutation ponctuelle 1672 C>T ,on fait une PCR " classique " à partir de son ADN .

Quand on parle de PCR classique est ce que c'est celle qu'on a vu pour l achondroplasie avec l'utilisation de endonucleases spécifiques ?

Où bien là juste on PCR / on amplifie pour ensuite séquencer les séquences des exons et c'est en regardant tt le séquençage qu'on trouve la mutation ?
Si c'est ça pq pour l achondroplasie on utilise des enzymes endonucleases et pas juste on séquence et on regarde où ça bug ?

Merci beaucoup beaucoup beaucoup !!

[AnNévrisme]

Salut !

C'est une bonne question que tu poses.
En fait tu as bien compris c'est le deuxième cas pour te citer :

"On fait une PCR / on amplifie pour ensuite séquencer les séquences des exons et c'est en regardant tt le séquençage qu'on trouve la mutation."

Pourquoi ? Parceque pour l'achondroplasie la mutation est décrite et connue c'est à dire qu'il y'a deux mutations qui donne l'achondroplasie et point barre (de ce qu'on sait hehe mais du coup part de ce principe). Donc soit sur l'exon 10 codon 380, c'est la mutation c.1138 G-> A auquel cas BfmI coupera, soit c'est c.1138 G-> C auquel cas c'est HpaII qui coupera.
on essaie les deux

Et dans tous les cas on se doit de séquencer derrière pour vérifier tout de même (c'est un diagnostic ça a beaucoup de retombé il faut pas se louper).

-> mais alors pourquoi pas séquencer direct ? la prof à répondu l'année dernière : la technique PCR-RFLP est beaucoup plus rapide et simple. Ça permet d'avoir une première idée et c'est assez important sachant que le diagnostic de cette maladie est important à poser étant donné la décision qu'il peut en découler pour les parents.

Pour Wolfram toutes les mutations sur n'importe quel nucléotide du gène sont susceptibles (attention on peut très bien aussi se retrouver avec une mutation silencieuse qui n'aura aucun impact!) de donner une protéine mutée -> il n'y a pas de mutations spéciales décrite (=expliquée et prouvée dans des articles scientifiques) donc on séquence le gène directement et on compare la séquence de notre patient à celle d'un individu contrôle sain pour voir s'il y'a des différences qui pourraient expliquer les symptômes cliniques.

Donc retiens : en routine

Suspicion d'achondroplasie : PCR-RFLP puis Séquençage pour confirmer

Autre mutation de gène pouvant venir de plusieurs mutations (substitution, délétion, site cryptique...) : PCR suivie d'un Séquençage

C'est plus clair pour toi ?

[Verveine]

Oui c'est parfait merciiiii !

[Verveine]

Ah non juste une précision !
Du coup là quand la prof parle de la mutation ponctuelle 1672 C > T c'est seulement dans l'exemple ?
Ce n'est pas systématiquement cette mutation là c'est bien ça ?