Salut
Au début on est souvent un peu paumée t'en fais pas ahah !
En fait il faut repartir du début. Quand l'enfant arrive au labo on lui fait un prélèvement sanguin puis on extrait l'ADN de ces cellules.
Ensuite on va vouloir faire une PCR des exons qui nous intéressent -> ceux du gène WFS1 ici.
On va donc choisir nos amorces de PCR complémentaires à des suites de nucléotides de ce gène (on les connait car il nous a été donné de séquencer le génome humain entier et les gènes ont leur suites caractéristiques de nucléotides).
On place l'ADN du patient et tout ce qu'il faut pour la PCR dans un tube.
Du coup on est d'accord qu'étant donné que le fils a reçu ce gène en deux exemplaires : un sur le chromosome paternel et un sur le chromosome maternel les deux versions seront ensemble dans le tube.
La PCR va alors amplifier les deux allèles dans le même tube.
Quand on va vouloir séquencer tous les fragments du tube (donc allèle père et mère mélangés) :
-si les fragments sont de la même taille pas de soucis pour lire sur le gel (si Sanger) la suite de nucléotides (même si les deux allèles ont des nucléotides qui diffèrent ont pourra lire tout ça sur le gel) c'est l'exemple de la famille A
-s'ils sont de taille différentes comme dans le cas de la famille B (avec les deux ADNc obtenus à partir de l'ARNm) à l'endroit où l'un des deux à une séquence en plus par rapport à l'autre tout va se chevaucher et on ne comprendra plus rien (cf.derniere page de la ronéo 1)
C'est mieux pour toi ?
