NGS et amplification ADN

[camcamnéus]

Salut !

J'ai une petite question concernant l'étape d'amplification de l'ADN lors du NGS. En effet, à la fin de N cycles de PCR, je n'arrive pas à comprendre si l'on a un ADN simple ou double brin sur le schéma (ronéo 2 p19) j'ai l'impression qu'il s'agit d'ADN double brin, mais par la suite on parle d'ADN polymérase etc

EDIT: En fait la sphère contient un ADN simple brin, et c'est lors du séquençage où l'on obtiendra un ADN double brin (avec la libération du H+ etc) c'est ça ?


Merci d'avance !!!

[AnNévrisme]

Coucou !

Alors tu t'es très bien répondu dans ton édit !

En fait le brin dont l'extrémité 5' est biotinylée viendra s'hybrider par son extrémité 3' complémentaire au primer de la sphère.
Ensuite on place les sphères dans les puces et le séquençage commence: avec l'aide des dNTPs et du primer de la sphère la polymérase entamera l'élongation (de 5' en 3' du coup, on est bon!) Et la variation de pH ou non permettra au final de déterminer la séquence.

C'est ok ?

[camcamnéus]

Merci beauuuuuuuucoup