dm sides Qcm 9

[inesctorza]

Merciii pour ce dm!!! est ce que tu peux juste expliquer l'item C du qcm 9 stppp , j'ai pas réussi et je voulais comprendre comment on trouvait ces valeurs , j'arrive pas qd c'est avec la mutation
merci

[BloodyMary]

+1 je n'ai pas compris la résolution du C

[lisaa_arnd]

En gros ( je crois mais je veux bien confirmation ), à la place d'avoir un seul fragment entre BamHI et SvaII, ton insert est coupé au milieu donc ca fait que le fragment est coupé en 2 : un depuis BamHI jusqu'au milieu de l'insert, et un autre du milieu de l'insert jusqu'à SvaII (+ le 3ème qui a pas changé entre SvaII et BamHi)

Mon explication est pas ouf mais bon haha

[inesctorza]

merci c'est gentil!! tu peux juste me décrire le calcul que tu fais stp j'arrive pas trop à visualiser comme ça genre je comprends ce que tu veux dire mais j'arrive pas à l'appliquer

[Gabriellegabrielle84330]

+1 je comprends pas la résolution de l'item C, sans insert on se retrouve avec 1650+850 et donc ensuite l'insert fait 200 il est coupé au milieu donc 100+100 et donc je n'arrive pas à comprendre comment on obtient 850+350+1500 ?

[Clémencéphale]

Oui moi aussi pas compris (pourquoi n'est ce pas 1750 + 850 + 100 ?)
Chose étant vraiment MERCI beaucoup pour votre implication de vous dans le tutorat on a beaucoup de chance depuis le S1

[lisaa_arnd]

C’est le fragment de 1850pb qui est coupé en un fragment de 350 et un autre de 1500, la fin de l’insert ne signifie pas une coupure, ça continue jusqu’à SvaII à partir de la moitié de l’insert (tout comme ça part de BamHI jusqu’à la moitié de l’insert sans coupure au niveau du début de l’insert)

Les seuls endroits où ça coupe c’est là où y’a des enzymes

[Gabriellegabrielle84330]

j'ai pas compris pourquoi on coupe a 350 ? et qu'on obtient donc 350+1500 ?

[lisaa_arnd]

Pck BamHI est à la position 50 et ton insert à la position 300, du coup ça fait 250 jusqu’à l’insert+100 jusqu’à l’enzyme de l’insert (qui coupe au milieu) donc 350. Après t’as les 100 restants de ton insert + 1400 jusqu’à SvaII donc 1500
C’est compliqué à expliquer faut vraiment regarder avec la carte et imaginer l’insert dans le plasmide genre l’intégrer dedans sinon c’est difficile à visualiser

[Lea Harrosch]

Moi c'est le fragment de 850 que je n'arrive pas a trouver parceque du coup on a 2500-(1500+350) non ? Ca fait 650

[Clémencéphale]

Perso j’avais fait Sva II - BamHI = 1700-50 -1650
Et ensuite vu que le plasmide fait 2500 : 2500-1650 = 850
(Je crois que ton erreur vient du fait que tu as soustrait avec l’insert )

[lisaa_arnd]

Celui de 850 c’est de SvaII (1700) jusqu’à BamHI (50) et vu que le plasmide fait 2500 ça fait de 1700 a 2500–> 800 + les 50 pour aller jusqu’à BamHI

[Lea Harrosch]

Merci clemence ! C'est a j'ai soustrait avec l'insert

[AnNévrisme]

Salut à tous merci à Lisa d'avoir répondu !

Je vous met un schéma d'explication :

IMG_20200511_120806.jpg (20.59 Kio) Vu 719 fois

Les infos +++ importantes dans l'énoncé à avoir en tête et à bien comprendre :

1.

Le produit PCR est inséré en position 300 sur le plasmide

Ça veut dire comme sur le schéma, qu'on coupe le plasmide à sa 300ème paire de bases et qu'on va insérer à cet endroit là l'insert (cf. Étape du cours de ligation avec la T4 dna ligase et l'histoire des extrémités franches et cohesives)

2.

La taille du produit PCR est de 200 paires de bases

3.

la présence de la mutation crée un site pour l’enzyme O-RNELLA qui clive le produit PCR en 2 fragments de 100 pb

--> on parle de coupure par O-RNELLA qu'en cas de mutation
--> quand elle coupe, elle coupe l'insert en son milieu (étant donné qu'il fait 200pb de bases)

Il faut bien comprendre qu'une fois l'insert intégré au plasmide (Formation de l'ADN Recombinant) plasmide et insert ne font plus qu'un. Ils sont soudés par l'ADN ligase.
Le plasmide garde le même nombre de paire de bases qui lui sont propres ET intègre celles de l'insert.

Pensez : c'est comme si vous rédigiez un paragraphe de 10 lignes. Puis une fois fini vous décidez de rajouter en plein milieu d'une phrase (au milieu de la 3ème ligne) un nouveau mot.
--> le paragraphe c'est le plasmide, le mot c'est l'insert.

[Lea Harrosch]

J'ai du mal avec ton fragment bleu, il me semblait qu'on devait partir dans le sens anti horaire

[inesctorza]

c'est bon pour moi merci bcp et merci Lisa! je laisse le post ouvert du coup

[inesctorza]

est ce que il y a des qcm de ce type (avec l'histoire de la mutation) pour pouvoir s'entrainer ou pas ? si oui , c'est ou stp ??

[Lea Harrosch]

En fait ca revient exactement au meme de le faire de l'autre sens

[AnNévrisme]

Ines : oui, en fait dans les annales le premier en 2017 (surprise des PACES cette année là...) et dans les annatuts (du coup depuis 2017)
On en a fait pas mal cette année:
- dans nos tuts,
- tu peux aussi en retrouver un dans le diapo 2 de la tut rentrée (avec correction)

Léa : oui, dans la methodo que j'ai mis sur le forum je parle de commencer à lire le plasmide dans le sens anti horaire car j'ai trouvé que c'était la façon la plus "simple" d'aborder la technique de résolution quand on est confronté pour les toutes premières fois aux qcms. Ensuite avec l'entraînement on fini tous par avoir un peu sa "propre méthode de calcul des fragments"

[inesctorza]

toppppp merci bcp !!!!