frap&flip

[feryel]

salut, en fait je voulais savoir pourquoi dit on que la technique de flip permet de mettre en évidence la vitesse des molécules et que celle de frap nn?? parce que calculer la vitesse de réapparition ou de disparition des fluochromes c la mm chose nn??

[feryel]

ah oui , je voulais savoir aussi c'est quoi exactement une sonde ADN???merci

[Dadaski]

Calculer le moment de réaparition total de la fluorescence et calculer le moment précise de disparition totale de la fluorescence c'est pas la mm chose...
En effet, comme l'intensité lumineuse avant le FRAP est légerement supérieure à celle une fois la fluorescence regagnée ( tu a quand mm blanchie qq fluorochromes) il est impossible de savoir avec précision quand la fluorescence est entiérement regagner (en fait ça n'arrive jamais, on arrive juste à un nouveau maximum de fluorescence...).
Par contre on peut très bien savoir le moment ou l'intensité lumineuse devient nulle. C'est pourquoi le FLIP permet une notion de vitesse et le FRAP non.
Bien entendu le FRAP permet tout de mm de se faire une idée de la vitesse, mais on ne peut la calculer précisemment.
C'est un peu dur à expliquer, j'espère que tu as compris...

Pour ce qui est de la sonde ADN, c'est un brin d'ADN fluorescent qui permet de visualiser sont brin complémentaire...

[feryel]

on va dire que j'ai moyennement compris lol, mais merci qd mm, au mieux si jcroise l'un des tuteurs je lui demanderais un peu plus de détail

[nenyan]

@ Dadaski > honnetement, je pense que le differentiel d'intensité lumineuse juste avant le photobleaching et juste apres un recovery complet soit le vrai problème, vu que la quantité de fluorochrome blanchie n'est pas super importante et qu'on pourrait de toute façon palier ce problème en enregistrant la variation de l'intensité lumineuse : quand la variation est nulle, le recovery est complet

Je pense que le problème vient surtout du fait qu'on n'a qu'un seul point de référence : la zone photoblanchie.
Pour mesurer la vitesse de déplacement, il faut par définition, connaitre la distance entre un point A et un point B, et connaitre le tente du parcours A-B
Dans un FRAP, on a qu'un point A (de photobleaching) et en mesurant la vitesse de déplacement il y aurait le probleme du fait que les fluorochromes qui vont se replacer dans la zone photoblanchient viendront de toutes les zones adjacentes a la zone photoblanchie.

Dans un FLIP, on a 2 points de référence: la zone photoblanchie, et la zone scrutée, on a donc une distance A-B mesurable (et mesurée d'ailleur ^^), certe, les fluorochromes viendront aussi de toutes les zones adjacentes a celle photoblanchie, mais vu qu'on ne mesure que la fuite de fluorochrome de la zone scrutée, j'imagine qu'on peut avoir une idée assez précise de la vitesse de diffusion entre un point A et un point B.

Je pense que c'est plus pour ça