Méthode FRET

[Will]

Bonjour à tous en cette belle journée ensoleillé et cette merveilleuse journée de tutorat

Alors je viens à vous car aujourd'hui en bio cell, et sur un ronéo de l'année dernière d'unes des ronéoistes de cette année qui se reconnaitra si elle me lit et que je salut, on parle de méthode FRET par rapport à la microscopie photonique. J'ai compris la FRAP et la FLIP mais pas celle la. Pouvez vous me l'expliquer et aussi son utilité? car je n'ai pas trop saisi la différence non plus entre le FRET intermoléculaire et intramoléculaire.

[eti06]

Alors tu imagines 2 protéines fluorescentes très proche
Il faut que le spectre d'émission de la première corresponde spectre d'absorption ( d'excitation ) de la seconde.
Si ces molécules sont effectivement assez proche il peut y avoir FRET, c'est à dire qu'en excitant la première tu va aussi exciter la deuxième grâce à la fluorescence de la première. Et donc tu n'observe que la fluorescence de la seconde protéine.
FRET intramoléculaire ce phénomène se produit au sein d'une seule molécule contenant 2 protéines fluorescente.
FRET intermoléculaire c'est entre 2 molécules distinctes très proche que le phénomène se produit.

[Will]

Donc il faut d'abord que la première protéine ait une émission, qui correspond à l'absorption de la seconde protéine c'est bien ça?
Tu dis pourtant qu'on excite aussi la première?

[eti06]

Oui c'est bien ça, on excite la première qui avec son émission excitera la seconde protéine fluorescente car leur spectre coïncide.

[valentin]

Quand on excite la premiere, elle donne un spectre d'emission. Celui doit coïncider avec le spectre d'absorption de la deuxième. Si c'est le cas, on peut observer le spectre d'émission de la deuxième.

[Will]

C'est bon j'ai compris merci à vous en gros la première sert d'intermédiaire et transmet?

[valentin]

Je sais pas si on peut ou non parler vraiment d'intermédiaire. Mais disons qu'en excitant la première, on voit s'il y a FRET ou non. Je m'explique : Si on observe le spectre d'émission de la première --> pas de Fret. En revanche si on observe le spectre d'émission de la deuxième --> FRET! =)
Se sera le spectre d'émission observé qui déterminera si il y a ou non FRET.

[Will]

D'accord merci de l'explication.

[valentin]

Y a pas de quoi