Achondroplasie - Digestion et séquençage

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Salut,

Alors j'ai pas bien compris : Lorsque l'on recherche la mutation de l'achondroplasie, on fait les étapes de prélèvement/extraction/Amplification/Vérification des amplicons et à l'étape de digestion on nous dit que avec l'enzyme Bfml ca ne coupe pas -> pas de mutation (G->A) et qu'avec Hpall ca ne coupe pas non plus (G->C).
Et ensuite lorsqu'on vérifie avec le séquençage on trouve une mutation... l'allèle a été coupé car "il présente un site de reconnaissance pour l'enzyme" (laquelle ?).
Elle sort d'où cette mutation ??

Merci d'avance

[Yanousa]

Bonjour, ici Yanousa ! Je te fais un petit récap pour que tu comprennes mieux, si c'est toujours pas assez clair hésites pas à me le dire


Pour bien comprendre l'encadré de la vérification par séquencage, tu dois te placer sur la quatrième piste du gel analytique par électrophorèse.

Tu vois apparaître sur cette piste, trois fragments distincts (164pb ; 109 pb ; 55 pb). La mutation est HETEROZYGOTE (1 allèle sain / 1 allèle muté)

Le fragment de 164 pb correspond à l'allèle sain

Les fragments de 109 pb et 55 pb correspondent à l'allèle ayant été muté sur le codon 380 en position 1138 du gène FGFR3



Comme tu l'as justement précisé, il existe deux types de mutations dans l'achondroplasie qui dans les deux cas aboutissent à une ARGININE :

Premier cas : Une guanine est remplacée par une adénine (mutation reconnue par BfmI)
Deuxième cas : Une guanine est remplacée par une cytosine (mutation reconnue par Hpall)


Cependant, comme l'allèle muté a été coupé en DEUX fragments, c'est parce qu'il présentait un site de reconnaissance spécifique à l'une ou à l'autres de ces deux enzymes.
C'est pour cela qu'on dit que "le foetus porte la mutation définie selon l'enzyme utilisée", parce que la mutation en position 1138 est reconnue ou bien par Hpall ou bien par BfmI mais dans les deux cas, elles coupent toutes les deux le fragment muté en deux.


Est-ce que c'est plus clair pour toi ?

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Oui merciii ça j'ai compris !
Donc dans l'encadré d'avant " digestion par amplicon" il est simplement expliqué comment fonctionnent ces enzymes et pas le résultats de leur activité ?

[Yanousa]

Dans tous les cas, tu peux déduire le résultat de leur activité sur le gel !

D'ailleurs, si un schéma de gel électrophorétique venait à tomber, on vous préciserait quelles sont les enzymes qui coupent

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Super Merci !