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[Résolu] PCR


[Résolu] PCR

Messagepar Da-Na » 23 Nov 2020, 21:32

Bonjour!

Dans la ronéo sur la PCR RFLP pour l'achondroplasie, je ne comprends pas pourquoi à la page 11, dans l'électrophorèse, les amplicons fœtal sont au même niveau que les amplicons d'un ADN sans achondroplasie, ducoup on dirait que le fœtus n'es pas malade ici, mais après dans les digestions enzymatiques on voit qu'il l'es. Je comprends pas trop, est-ce que j'ai mal compris l'électrophorèse?

Merci d'avance ! :D
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Re: PCR

Messagepar TriPhosphatE » 24 Nov 2020, 00:11

Coucou :) est ce que tu peux me montrer une image de ce que tu ne comprends pas ?
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Re: PCR

Messagepar Da-Na » 24 Nov 2020, 11:43

Oui enfait dans la photo, on dirait que le fœtus n'est pas malade, puisque l'amplicon est au même niveau que le C du contrôle qui n'a pas l'achondroplasie.
Sauf que quand on continue avec les enzymes on voit qu'il est malade, vu que les enzymes découpent l'amplicon.
Ducoup je me demandais si c'était normal ou peu être que j'ai mal compris :question:

Si c'est pas très clair, j'essaie de réexpliquer. Merci d'avance :D
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Re: PCR

Messagepar TriPhosphatE » 24 Nov 2020, 12:04

Ok je vois ce que tu veux dire :) alors attention, l'électrophorèse que tu m'as montré n'est pas la pour identifier la mutation mais il sert de VERIFICATION de l'étape précédente qu'est la PCR.

En effet avec la PCR ici on veut amplifier une région de 164 pb (paires de bases) contenant la mutation. L'électrophorèse nous montre bien que l'amplicon fait 164 pb donc on a amplifié la bonne région.

Cependant les électrophorèses suivantes sont là pour identifier la présence ou non de mutations grâce aux enzymes de restriction.
Voici l'image que tu as dans le cours:
amplicons.PNG


Ici on a appliqué une digestion par enzymes de restriction qui coupent l'amplicon si la mutation est présente. Tu vois sur la 4e piste qu'il y a 3 amplicons: un a 164 pb, un autre à 109 pb et un dernier à 55 pb. Ca veut dire quoi ? @@

Un des deux allèles du gène a été coupé ce qui donne ces deux fragments à 109 et 55 pb. Celui à 164 pb représente l'allèle sain. Ainsi on sait que cette personne est hétérozygote pour la mutation car un allèle sain et un autre muté.

Par ailleurs je tiens à te le dire car l'image ne montre pas le résultat d'une personne homozygote. Dans ce cas tu n'auras que 2 amplicons sur la piste : un à 109 pb et un à 55 pb car ici les deux allèles sont coupés vu que les deux sont mutés exactement au même endroit :wink2:
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Re: PCR

Messagepar Da-Na » 24 Nov 2020, 13:05

Merci pour ton explication, c'est beaucoup plus clair ! :angel:
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