ronéo 11: site hypersensible

[célou]

Salut tout le monde!

A la p10 de la ronéo: on met en évidence les site hyeprsensibles.

J'ai un petit problème de compréhension à ce niveau la, est-ce que les sites hypersensibles correspondent au 2,2kb dans cette expérience? ou c'est plutôt les 4,5 - 2,2 kb?
Comme ce sont des sites hypersensibles ce sont eux qui sont détruit en premier. Du coup je ne comprend pas trop comment il peut rester 2,2kb avant la disparition complète.

merci pour vos réponse et j'espère que ma question est a peu près compréhensible lol.

[-Alexis]

Salut célou !

Alors en fait, ton site hyper sensible correspond exactement à l'endroit où la DNase1 va couper quand on la met à très faible concentration.

Sur le schéma tu vois que le fragment de 2,2pb contient le gène globine et s'étend à droite. Il y a aussi une flèche qui indique exactement où se situe le site HS.
Donc le site HS ne fait pas du tout 2,2kb ou 2,3kb (4,5-2,2). Par contre, il se situe exactement à 2,2 kb en partant de la droite de notre régione coupée par HindIII.

En gros, tu as un gros truc (4,5kb), tu les coupes à un endroit qui va être un site HS. Du coup tu te retrouves avec 2 bouts (dont un qui fait 2,2kb!) Tu fais 4,5 - 2,2 et tu trouves l'endroit exacte où tu as coupé.

Ensuite, comme toute la région (les 4,5kb) est globalement une région sensible à la DNase1, si tu augmentes ta concentration, tu dégrades tout !

Voilou, j'espère que c'est compris, n'hésite pas si t'as un soucis

[célou]

ah ok merci j'avais pas compris comme ça

[MelB]

Besoin de précision :
Donc quand on est dans un gène "compétent" à la transcription, pas de FT, donc pas de site HS ?
Donc Dnase1 coupe tout ?
Gène actif quelque soit la concentration DNase1 coupe pas FT protéger... ?

je m'embrouille un TOUT PETIT PEU --

[Mika]

Besoin de précision :
Donc quand on est dans un gène "compétent" à la transcription, pas de FT, donc pas de site HS ?
Donc Dnase1 coupe tout ?
Gène actif quelque soit la concentration DNase1 coupe pas FT protéger... ?

je m'embrouille un TOUT PETIT PEU --

hellow !!
Alors dans un gène compétent à la transcription, PAS DE SITE HYPERSENSIBLE !! Mais attention, la DNAse 1 va couper
Par contre, pour un gène transcrit tu auras un site hypersensible, et bien évidemment la DNAse 1 pourra également couper a certains endroits (comme pour le gène compétent = transcriptible)

Voilà j'espere que c'est plus clair pour toi !!

[MelB]

Merci

[yon]

Je rajoute une petite question :
le site HS comprend une ou plusieurs régions complétement protégée?
Parce qu'en plus du FT, on a aussi le complexe d'initiation...

[-Alexis]

Le prof n'a parlé que du FT...

[Chob]

Bonjour !
Je rajoute une petite question sup concernant le HS pour voir si j'ai bien pigé :
la DNase 1 ( à faible concentration ) , elle coupe dans le site HS , et le site HS est bien une region de l'ADN de plusieurs kB.

Donc dans l'exemple avec IP3 ( ou HindIII ) , dans notre segment de 2.2 kB , selon où a coupé la DNase 1 dans le HS ( au mileu , à droite , à gauche là où ya pas les FT ) , on va avoir des bases qui font parties du SH normalement , c'est exact ?

[yon]

@ Alexis : merci de ta réponse

@ Chob : lors de cette titration :
- au départ : fragment de 4,5 kb
- à la fin : que du 2,2 kb
Sachant que tu as digéré que le Site HS, t'en déduis que :
site HS = 1 kb 0,1 kb
reste du domaine sensible (donc sans compter le site HS) = 4,4 kb

[Chob]

Huu... pourquoi HS = 1kB ? ^^

[yon]

Zut! Sais plus compter!

Taille de HS = 0,1 kb , of course!

PS: j'édite l'autre post

[Chob]

Mdrr c'etait pas ca qui me choquait xD
C'est juste que j'ai pas compris du tout comment tu resonnais : tu peux m'expliquer ? ^^

[yon]

Sur le schéma de la titration, on a 2 bandes :
- 4,5 kb => portion entière
- 2,2 kb => c'est les 2 portions (une à gauche, une à droite) qui restent après avoir digérer le site HS

HS = 4,5 - 2,2 - 2,2 = 0,1 kb

[-Alexis]

Resalut tout le monde !

yon il est bien possible que tu aies raison ! C'est une bonne explication et je la prends ^^ Ca m'étonne quand même que le site HS se trouve pile au milieu de notre séquence...mais bon, je ne vois vraiment aucune objection à ton explication alors pourquoi pas ! Par contre pour la taille exacte du site HS, tu ne peux pas la trouver avec une électrophorèse. C'est vraiment une grosse approximation...

Chob, alors oui, le site HS est bien une région de l'ADN (puisque au milieu du site HS il y a encore un site protégé !) mais à mon avis il ne fait que quelques pb ! A la limite quelques dizaines voire centaines mais je ne pense pas qu'on en arrive aux kb !! En cherchant sur internet je trouve que le site HS est une séquence qui fait environ 200 pb. (A mon avis ça doit varier suivant les gènes...)

Voilou, @+

[Chob]

Aaah ca me rassure que tu ne comprennes pas la méthode de Yon xD ( désolée pour toi Yon ^^ ).
Je pense aussi qu'on ne peut pas connaitre par cette méthode la distance du SH .

Merci !

[yon]

yon il est bien possible que tu aies raison ! C'est une bonne explication et je la prends ^^ Ca m'étonne quand même que le site HS se trouve pile au milieu de notre séquence...mais bon, je ne vois vraiment aucune objection à ton explication alors pourquoi pas ! Par contre pour la taille exacte du site HS, tu ne peux pas la trouver avec une électrophorèse. C'est vraiment une grosse approximation...

Oh, il a édité!

[-Alexis]

J'ai compris en lisant ton deuxième post !

Même si ça me semble tiré par les cheveux, why not ?!

Relis mon post et celui de yon qui est juste avant Chob. Si tu ne comprends pas cette explication reviens te manifester !