Le noyau expérience enzyme micrococcales

[BlackJesus]

Bonsoir;

Juste une question je ne comprend pas comment via l'enzyme micrococcales il est possible de mettre en avant si les cellules sont entrain de mourir par apoptose ou non, si quelqu'un pouvais m'expliquer ?

Merci d'avance !

[-Alexis]

BlackJesus, bonjour !

1) Si tu fais une digestion partielle de l'ADN avec ton enzyme microccocale, les digestions vont avoir lieu au niveau de l'ADN linker tous les 1,2,3...nucléosomes (pas de digestions entre tous les nucléosomes car là on fait une digestion partielle : faible concentration de microccocale ou alors faible temps de digestion).
Tu fais migrer tes bouts d'ADN sur gel d'agarose et tu vas avoir quelque chose avec des "paliers". Les bouts constitués d'un seul nucléosome migreront beaucoup, mais tous à la même vitesse, de même que les bouts constitués de 2 nucléosomes qui migreront un peu moins, et ceux constitués de 3 nucléosomes qui migreront encore moins.

2) Il faut savoir que lors de l'apoptose (contrairement à la nécrose) il y a fragmentation de l'ADN (et condensation de la chromatine). C'est-à-dire que ta cellule apoptotique va elle-même sécréter des nucléases qui vont couper au niveau de l'ADN linker entre certains nucléosomes. Du coup, tu va te retrouver avec des bouts d'ADN qui contiennent 1, 2, 3... nucléosomes.
Tu fais migrer tout ça sur de l'agarose et tu retrouves les mêmes répartitions (sur ton gel) qu'avec une cellule vivante dont l'ADN a été digéré à la microccocale : tu conclues que ta cellule 2) était en apoptose !

Si tu avais une cellule vivante (tu cherches à voir si elle était apoptotique ou vivante) que tu prends son ADN et que tu le fais migrer, il va migrer d'un seul bloc (ton ADN n'a pas été coupé par les nucléases sécrétées normalement lors de l'apoptose). Comme tu auras un seul gros bout d'ADN, il migrera très très peu.

J'espère que ca ira, n'hésite pas si c'est pas clair.
in Tutorat we trust

@+

[BlackJesus]

Ok cest parfait jetais pas sur que lors de lapoptose la cellule fragmentée sont ADN mais maintenant c'est clair merci