Ronéo 5 page 5

[WatiGG]

Salut ! J'arrive sur cette page parlant de l'immunoprécipitation…

… Et je trouve quelques trucs incompréhensibles.

"En ce moment on commence beaucoup d'études sur ces protéines et on va mieux comprendre les mécanismes. De plus, on n'est pas toujours obligé de fusionner la protéine entière, on peut aussi fusionner seulement des domaines, donc une partie de la protéine."

o__o ?
Fusionner ? Quoi avec qui ? Quel rapport avec les études sur les protéines ?

puis "En fonction de la propriété de la protéine hybride, on va pouvoir déduire le rôle de ce domaine"

Quelle protéine hybride ? Pourquoi on parle tout à coup d'une protéine hybride ? Est-ce que c'est la protéine actine-GFP de l'exemple (je pense pas mais bon…)?

J'attends vos éclaircissements ! =)
Merci

[max.l]

Pr la première, il me semble que jusque là, gilson "s'amusait" a marquer une prot à la GFP ou à arreter sa synthèse en induisant une recombinaison ciblée contenant un gène KO. Eh ben là, c'est tjs ciblé et au lieu de tuer la synthèse tu t'amuses a faire des petits changements sur ton gène pr voir si ca change la fonction de ta prot.. donc toute ta prot n'est pas remplacée..
Donc c'est cette prot un peu spéciale qui va etre fonctionnelle ou pas.. (ca, ca dépend de ce que t'auras modifié) qui est ta prot hybride.
pr rappel c'est un peu ce qu'on avait fait avec la GFP pr obtenir des variants, on modifiait la triade d'AA qui constituait le chromophore pr obtenir la YFP ou BFP ou jne sais encore quelle magnifique prot fluo

[-Alexis]

Je vous dis ça d'ici à demain. Désolé pour le retard des réponses.

[-Alexis]

Salut à tous, encore désolé pour le temps de réponse

Bon, alors en fait quand Gilson se met à partir en live et à parler vite, il fait des petites erreurs, d'où la difficulté de compréhension.

"En ce moment on commence beaucoup d'études sur ces protéines et on va mieux comprendre les mécanismes. De plus, on n'est pas toujours obligé de fusionner la protéine entière, on peut aussi fusionner seulement des domaines, donc une partie de la protéine."

Dans tout cet exemple, Gilson parle d'un gène, ou d'une protéine hybride hypothétique. Il ne prend pas d'exemple précis, il parle dans l'absolu.

En fait on devrait parler de gènes codant pour des protéines pour être exacts. On ne va pas faire fusionner (par recombinaison homologue ou illégitime) le gène complet avec notre ADN mais un gène tronqué, ou modifié. Pour modifier un gène, tu changes quelques bases azotées dans ta séquence. En fait, une on "invente une mutation" qui pourrait éventuellement se produire dans la vraie vie. Mutation non sens (on tronque le gène, donc la protéine sera plus courte => structure 3D différente => fonctions différentes... => ... ) ou mutation faux sens (on change quelques nucléotides).

Pour la fusion des domaines, c'est pour observer quelle partie de la protéine va faire quoi (une partie peut servir de ligand, un autre avoir une activité enzymatique et une autre encore avoir une activité enzymatique différente. Tout ça sur la même protéine. Par exemple si tu veux étudier uniquement la tige d'une protéine de kynésine, et ben tu vas isoler la séquence du gène qui code pour cette partie de la protéine. Et tu ne vas fusionner avec ton ADN que cette partie du gène.

Comme l'a très bien dit max, c'est exactement ce qu'on fait les chercheurs pour obtenir des variants de GFP. Ils ont remplacé quelques nucléotides à droite à gauche sur le gène codant pour la GFP et ont pu faire varier les spectres d'emission et d'absorption de la protéine.

Bon courage et à bientôt !

[WatiGG]

Ca va mieux, merci !

Je pense quand même que cette partie manque pas mal d'éclaircissements (même quand tu l'explique, on voit que Gilson fait abstraction de choses importantes). Je vais pas me concentrer dessus pour le moment mais en tous cas merci beaucoup j'ai compris la globalité ! =)