Roéno 5 - Notion de transgène

[yon]

H!

1) p4 : "donc attention, le gène puromycine c'est le gène qui détremine la résistance à la puromycine..."
En cours, je pense qu'il a plutôt dit :
le gène PURO détermine la séristance à la puromycine
le gène NEO à la néomycine
le gène HYGRO à l'hygromycine
(c'est pas d'une importance capitale, mais vu qu'il s'est donné la peine de les énumérer...)

2) p6 : quand on fait une recombianison homologue, ça va toujours aboutir à un Knock Out (donc au remplacement de la séquence d'ADN);
idem pour les recombinaisons illégitimes : le transgène reste en parallèle de l'ADN ou vient remplacer aussi le gène?

Merci!

[-Alexis]

Salut yon,

p4 : alors j'ai réécouté l'enregistrement et Gilson dit bien "le gène puromycine c'est le gène qui détermine la résistance à la puromycine" ensuite il dit "de même le gène hygromycine, le gène néomycine" et encore après il utilise "le gène puro", "le gène néo". Tout ça c'est absolument la même chose !!

p6 : pour les recombinaisons illégitimes, le gène s'insère un peu où veut/peut das la séquence d'ADN. Il ne reste pas en dehors. Il ne remplace pas non plus une séquence, il s'incère "en plus".

Voilà, à bientôt !

[GuillaumeVaast]

Salut Yon,

1) Alors pour ta première question, je ne sais pas trop quoi répondre, je n'ai pas fait la ronéo. Mais je pense qu'effectivement, ce n'est pas très important; il faut simplement retenir la nuance sur le nom du gène de résistance à ces antibiotiques.

2) Attention, la recombinaison homologue n'abouti pas toujours a un KO. Le KO= on bousille le gène en le coupant en deux du coups on en tire rien du tout. Il existe avec la recombinaison homologue d'autre technique comme le KI= knock in qui permet de remplacer le gène cible par un autre gène bien complet ( qui donnera quelque chose) en général de la même "catégorie" et qui va aboutir en gros au même résultat.
On peut aussi faire une mutagenèse dirigée, c'est a dire qu'on remplace le gène cible par un allèle volontairement mutée.
Tout ces termes ne sont pas a apprendre si le prof n'en parle pas mais je vous le dis parce que le prof fait tt le temps ce genre de chose dans ses expérience et en plus j'ai fait des recherches l'année dernière, il faut bien que ça serve.

2ème attention beaucoup plus important: lors de la recombinaison illégitime, le transgène ne reste pas en parallèle de l'ADN mais viens bien s'incorporer à ce dernier. Cependant, il ne remplace pas le gène cible, il va se mettre n'importe ou sur le brin d'ADN le gène cible est toujours actif et si la séquence introduite a un promoteur, elle sera aussi exprimée.

Voila voila, bon courage pour la suite.

[yon]

2 réponses de qualité pour le prix d'1, c'est top ça!

Alexis: désolé pour la 1), je sais pas ce que j'ai dû fumer alors!
Guillaume : super, c'est vraiment beaucoup plus clair maintenant!

[yon]

Ah, mince, dernière question :
dans l'intégration homologue (mais sans faire de Knock Out) le transgène reste en parallèle de l'ADN ou bien il s'y incorpore (comme tu viens de me l'expliquer pour la recombinaison illégitime, Guillaume)?

[GuillaumeVaast]

Re,

Dans la recombinaison homologue, la portion de gène qu'on intègre va remplacer le gène cible dans la séquence d'ADN. La nuance du KO, KI ou mutagenèse dirigée provient de la nature de ce que l'on intègre. (expliqué dans le post précédant).

Si tu as encore des problèmes n'hésites pas.

[yon]

C'est vraiment parfait!

Merci INFINIMENT!

[GuillaumeVaast]

De rien, on est la pour ça

[Farore-Azenor]

Salut,

J'aurais bien aimé avoir une petite explication sur l'introduction d'un gène de sélection lorsqu'il n'est pas dans le même ADN que le transgène, quand il y a co-transfection quoi. ^^
En fait, je ne vois pas très bien ce qu'il se passe dans la cellule, tout me semble très flou. Je crois avoir compris que les deux gènes séparés vont s'associer...mais dans ce cas là, on ne revient pas à la première méthode ? :/

[-Alexis]

Salut !

Alors oui, peut-être bien qu'on se rapproche de la première méthode mais à mon avis ça reste différent. Gilson n'en avait pas parlé l'an dernier et cette année il n'a pas du tout détaillé et est resté plus que très flou Donc ce n'est vraiment pas important.

Ce qu'il faut savoir c'est ce qui est dit dans le cours (et encore), à savoir : quand on introduit un gène de sélection qui n'est pas dans le transgène ce sera le bordel et des gènes peuvent s'associer, et tout un tas de trucs peuvent se passer, donc nous on le fait pas dans nos expériences.

Ne t'inquiètes vraiment pas pour ça. Le prof vous explique les mécanismes de la transfection mais en général c'est juste pour savoir que c'est possible et ne pas être outré quand dans une expérience il vous mettra "on transfecte le gène hybride blablabla"...

Voilà, désolé de ne pas t'apporter une réponse plus claire, bon courage !

[Farore-Azenor]

Ok, si ce n'est pas important. Je verrai bien dans les expériences. Merci quand même.