Topo sur le Fish ?

[Cécie]

Bonjour serait il possible d'avoir une autre explication de ce qu'est le fish .. je ne comprend pas bien ce que c'est, j'ai l'impression que c'est un genre d'immunofluorescence indirecte et d'un peu tout melangé j'aimerai bien que ce soit plus clair ..
Mercii !!

[BlackJesus]

Salut :

Le FISH (Hybridation in situ en fluorescence) permet de visualiser spécifiquement des séquences de nucléotide d'un ARN ou d'un ADN via des sondes fluorescentes

Pour observer un ADN il va falloir dénaturer cette ADN car il est double brins et que nous on veux a partir d'un brin d'ADN former par complémentarités des bases un ADNc (c pour complémentaire) fluorescent pour rendre le produit visible au microscope fluorescent, donc pour le dénaturer il faut chauffer (car sa brise les liaisons hydrogènes entre les bases) puis on hybride notre sonde puis on observe

Pour un ARN qui lui est seul brin (mais il existe aussi des ARN doubles brins mais je sais pas si c'est important de le savoir pour gigi ^^) tu ne doit pas dénaturer puisque tu as déjà qu'un seul brin donc tu hybride directement ta sonde sauf que les ARN eux ne sont pas de le noyau pour la majeure partie donc ta fluorescence sera concentrée dans le cytoplasme

A ne pas confondre avec l'immunofluorescence indirecte qui utilise la capacité de formation de complexes immuns AG/AC sur une protéine

J'espère que cela répond a ta question

[-Alexis]

Salut cecie, alors je sais pas si tu as déjà vu la fiche de la tut'rentrée, le paragraphe sur le FISH est le "7" tout en bas de la page 3 et qui continue sur le début de la page 4.

Fiche de la tut'rentrée : viewtopic.php?f=226&t=15777

Si tu avais déjà vu cette fiche et que tu n'as pas compris, voilà l'explication avec des schémas, c'est très clair. Il faut savoir qu'à la place de la molécule R tu peux directement greffer un fluorophore à ta sonde.

http://www.discip.crdp.ac-caen.fr/svt/c ... /index.htm
Ne t'occupes pas de la phrase d'introduction, pour nous on l'utilise simplement pour repérer un gène.

A bientôt !