questions en vrac sur derniers cours

[kitty]

bonjour =)

j'ai plusieurs questions concernant les dernieres ronéos

- ronéo 6 page 6 ii) cis golgi
"système d'invagination de la mb du RE" ce n'est pas plutot évagination ?

- dans la recombinaison en fct des homologues de séquence dans le cas ou on co-transfecte deux molécules d'ADN séparées, pk le gène va etre intégré plusieurs fois ? et qu'est ce qu'on entend par etre intégré plusieurs fois ?

- le peptide signal d'une prot à destinée mitochondriale est clivé avant ou après passage par translocase ? et ce peptide signal il est ajouté sur la prot déja formée ?


merci d'avance =)

[-Alexis]

re salut !

alors oui, c'est plutôt évagination, Gilson ne fait pas trop attention dans l'utilisation de ces deux mots. Fais surtout attention en embryo, histo ou BDR, ils sont rigoureux quand ils les utilisent.

alors déjà il y a une petite erreur de plan dans ma ronéo. Disons que je n'ai pas très bbien séparé les parties et j'en suis désolé.

En fait, si on regarde bien les diapos de Gilson, il commence par parler de la recombinaison illégitime, puis ensuite il parle de la recombinaison homologue. Jusque là pas de soucis, le problème c'est que après, sans prévenir il développe l'exemple de l'act-GFP qui se fait "généralement, par intégration au hasard" (diapo bas de la page 3 de la ronéo.

Le truc avec les concaténer il n'en avait pas parlé l'an dernier et cette année il n'avait pas de diapos pou rillustrés son propos du coup c'était un peu fouilli

Je vais essayer de te démêler tout ça : si on intègre nos 2 transgènes (un pour l'act-GFP, l'autre pour la puromycine) par électroporation ou vectorisation par vésicule, il est possible que plusieurs de ces transgènes rentrent dans la même cellule.
Par ailleurs une fois dans la cellule ils vont tous se réassocier ensembles (act-GFP+PURO d'abord, puis actGFP-PURO + act-GFP-PURO ensuite, sous forme de tandems. Les mécanismes et le pourquoi du comment ne sont pas expliqués par Gilson, toujours est-il que ça se passe comme ça. Ensuite la séquence va être intégrée (au hasard) sous forme de tandems ou de concaténer dans le génôme.

Je ne pense pas que cette partie soit très importante, Gilson n'en avait pas parlé l'an dernier, n'y a pas consacré de diapo cette année et en plus il a un peu baclé son explication...

alors le prof n'a pas développé l'exemple d'une protéine mitochondriale en cours, il a développé celui d'une protéine du RE. Cependant on peut facilement imaginer que ça se passe de la même manière.

Le peptide signal fait partie de la protéine. On a donc notre gène qui code pour la protéine, et sur ce gène, un séquences de nucléotides codera pour ton peptide signal qui se retrouvera en bout de protéine.

D'autre part, le peptide signal sera clivé sur la face interne de la membrane, donc une fois qu'il aura traversé la membrane grâce au translocon. Cependant le reste de la protéine traversera la membrane par le translocon après que le peptide signal ait été clivé par la signal peptidase. Je te renvoie à la diapo du haut de la page 22 de la ronéo 5.

Voilà, j'espère que c'est plus clair pour toi !

Bon courage et à bientôt !

[GathGath]

Bon sujet ---> Bonne explication j'ai trouvé pile poil mon problème ( les tandems et concaténer ). Merci pour cette explication Alexis