Applications de la transgénèse ( ronéo 5)

[Dawn]

Bonjour !

Il y a quelque chose que je n'ai pas compris dans la ronéo 5 page 4 :

" Applications de la transgénèse:

Donc on va exprimer ces protéines étrangères généralement étiquetées par un épitope ou un fluorochrome.
[...]
On aurait pu utiliser des Ac dirigés directement contre la protéine qu'on veut étudier [...] "

--> si j'ai bien compris, on fait s'exprimer à la surface de notre Ag (la protéine d'intérêt) des épitopes qu'elle n'exprime pas naturellement pour ensuite diriger (à coup sur ) des Ac sur notre Ag (ayant choisi les épitopes, on choisi les Ac qui y sont spé ). Et on fait de l'immunofluorescence indirecte ( avec greffe d'un Ac secondaire qui porte un fluorochrome ... ) ???

C'est pour cela qu'on dit qu'elle est étiquetée par un épitope ?? Mais je ne comprends pas le "ou un fluorochrome" ... ( ça fait allusion à l'immunofluorescence indirecte ? )

J'espère que je suis compréhensible ...

En tout cas merci d'avance !

[yon]

Alors, tu as ton transgène qui va coder pour une protéine : tu veux savoir un peu où va être la protéine pour appréhender sa fonction!

Etiqueter marquer pour pouvoir reconnaître après (localiser la protéine)

... par un épitope tu introduis dans ton transgène une séquence qui va coder une partie de ton polypeptide de telle sorte qu'il est une structure 3D reconnaissable par un Ac --> c'est l'épitope "artificiel"
Ensuite, tu utilises un Ac secondaire ... --> il s'agit donc bien de l'immunofluorescence indirecte!
Remarque : on pourrait prendre un Ac dirigé directement vers ta protéine sans que tu l'aies modifié (épitope "naturel") , mais généralement tu connais pas trop ta protéine donc trouver l'Ac qui va la reconnaître c'est pas facile (contrairement à l'épitope "artificiel" où là, tu décides toi même de l'épitope comme ça tu commandes l'Ac que tu préfères dans le catalogue)

... par un fluorochrome ton transgène contient la séquence codante de la GFP (qui est protéique) --> ta protéine ("hybride") sera fluorescente

PS: tu verras jamais gilson employer les termes d'épitope "artificiel" ou "naturelle", c'est juste pour t'expliquer!

[Dawn]

Merci Yon ! C'est super, maintenant tout est plus clair !

[-Alexis]

Confirmé !

Belle explication yon

[Dawn]

Merci de la confirmation Alexis !

Et je confirme ! C'est une belle explication !