Ronéo 14 - Technique de la caspase 3

[attention83]

Bonjour,

Dans la photo du gel d'agarose de cette technique je ne comprends pas pourquoi sur les puits 2 à 6 on obtient pas les memes resultats que sur les puits 7 à 11 puisque dans les deux cas on introduit de la caspase 3 et on a dit que c'est une des caspases principales permettant de déclencher l'apoptose. Sachant que le puit 1 correspond au puit témoin et que les durées d'exposition sont les mêmes.

Merci d'avance.
Bonne journée.

[Hope]

Ouf je suis pas la seule à me demander pourquoi dans les puits 2 à 6 l'ADN de la cellule ne se fragmente pas vu qu'on induit la caspase 3...
Juste il représente quoi du coup le M? La situation contrôle?

[Dawn]

Ah bah je suis dans le même cas que vous !

Juste il représente quoi du coup le M? La situation contrôle?

Ça aussi c'est un mystère ... parce que d'après moi je témoins c'est le 1 où l'on est en absence de caspase et où l'on voit qu'au bout des 120 min il ne s'est rien passé...

Oh je crois que j'ai compris en regardant ENCORE ce schéma !

--> puits 1 = témoins
--> puits 2 à 6 ==> on met la cellule en présence de caspase 3

OR la caspase 3 n'induit l'apoptose qu'au bout de 120 min ! soit au niveau du puit 6.

Donc:
-->puits de 7 à 11 : on progressivement la dégradation de la cellule qui est entrée en apoptose.

Voilà ! sinon HELP US !! S'i'ous plaît !

[margaux83]

coucou,
perso pour moi c'était le puit M le puit témoin mais bon....

[Dawn]

Je pense plutôt que M c'est la marque, le dépôt initial.

Parce qu'un témoins doit "subir" quelque chose non ??
--> pour le puits 1 on voit que la cellule a vecu 120 min dans une conditions spé = sans caspase ; et c'est au témoins qu'on compare les résultats en faisant varier le truc ( j'ai plus le terme scientifique en tête ^^) qui nous intéresse.

Après je me trompe peut être

[margaux83]

ben pour moi un témoin c'est un puit sans "le truc" qu'on veut tester (en l'occurence ici on veut montrer que la caspase3 induit l'apoptose donc le puit témoin ne contient que les cellules sans caspase3) du coup dans le témoin on montre que sans la caspase3 il n'y a pas d'apoptose. enfin je crois

[margaux83]

rooo ca y est tu m'as mis le doute Dawn... :s

[Dawn]

ben pour moi un témoin c'est un puit sans "le truc" qu'on veut tester (en l'occurence ici on veut montrer que la caspase3 induit l'apoptose donc le puit témoin ne contient que les cellules sans caspase3) du coup dans le témoin on montre que sans la caspase3 il n'y a pas d'apoptose. enfin je crois

Oui c'est ça.

Donc je pense vraiment que le puits 1 est le témoins ==> il passe 120 min sans caspase 3 ( puisque pour caspase 3 il a " - " ).

[Dawn]

rooo ca y est tu m'as mis le doute Dawn... :s

Oh je suis désolée ! Ce n'était pas mon but

[margaux83]

ah peut être alors j'ai pas l'ennoncé sous les yeux. Tkt je le regarderai demain et le doute sera levé bonne soirée

[Dawn]

bonne soirée à toi aussi !

Et demain on aura peut être une d'un super tut' !

[Hope]

--> puits 1 = témoins
--> puits 2 à 6 ==> on met la cellule en présence de caspase 3

OR la caspase 3 n'induit l'apoptose qu'au bout de 120 min ! soit au niveau du puit 6.

Donc:
-->puits de 7 à 11 : on progressivement la dégradation de la cellule qui est entrée en apoptose.

Oki vu comme ça ça pourrait marcher mais je vois pas pourquoi du coup au puit 7 ils ont pas écrit 150 minutes ... C'est pour ça je trouve ça louche

ben pour moi un témoin c'est un puit sans "le truc" qu'on veut tester (en l'occurence ici on veut montrer que la caspase3 induit l'apoptose donc le puit témoin ne contient que les cellules sans caspase3) du coup dans le témoin on montre que sans la caspase3 il n'y a pas d'apoptose. enfin je crois

Pour moi aussi.

Bref j'espère qu'on aura une réponse sous peu même si la dertermination exacte de chaque puits ne me parait pas fondamentale tant qu'on a compris le principe

Bonne soirée à vous

[attention83]

Le plus logique apres tout ca c'est que les puits 2 à 11 se suivent chronologiquement donc rien avant 120min puis à partir de 120min l'apoptose se fait et on voit donc la fragmentation progressive de l'ADN caractéristique de la cellule apoptotique.
Selon moi le puit 1 est le témoin et le M permet d'avoir des reperes sur le gel d'agarose.

Mais le minutage sur la photo n'est pas claire....
Y a plus qu'à attendre l'explication d'un tut ^^

[attention83]

J'ai peut etre une idée du pourquoi du comment.
Ca m'est venu en relisant la ronéo.

Ce qui différencie les deux séries de puits 2-6 et 7-11 ce n'est pas la présence ou l'absence de caspase3 car il y en a dans les deux mais c'est plutot la presence d'un signal induisant l'apoptose.
Plus haut il y a marqué que pour l'apoptose il faut un signal inducteur (signal ou absence de signal) qui induit l'apoptose et ces caractéristiques.

Donc cette experience me laisse penser que :
-dans les puits 2-6 on a les caspases et pas de signal induisant l'apoptose donc rien ne se passe
-dans les puits 7-11 on a les caspases et un signal induisant l'apoptose donc on aboutit à la fragmentation de l'ADN qui est maximale à 120min

Mais j'ai ca me fait quand meme tiquer un peu car un peu apres il y a marqué que la caspase3 est une caspase effectrice donc activée par une caspase effectrice...
Mais au final comme c'est une expérience on doit surement pouvoir aussi injecter directement la caspase3.

Dites moi ce que vous en pensez mais j'ai l'impression que ca a l'air de tenir la route

[Ondine]

Salut !
Alors ce que tu dis Attention83 est tout à fait logique !

J'ai regardé un peu sur les ronéos de l'an dernier, sur mes fiches de l'an dernier et sur la ronéo de cette année, et ce que j'en retiens c'est que ....
Ne vous prenez pas la tête avec ça à 10 jours du concours !!

Tout ce qu'il a voulu vous montrer c'est que lors de l'apoptose il y a fragmentation de l'ADN par les caspases au niveau de sites spécifiques d'où la présence de valeurs discrètes sur l'électrophorèse !

Joyeux Noël à tous !

[attention83]

Ok merci Ondine et joyeux Noel a toi aussi !!!