QCM 7 tutorat 1

[BlackJesus]

Salut !

Je n'arrive pas a mettre la main sur les 4 étapes nécessaires pour le Northern Blot et le Western Blot si quelqu'un pouvais me les donner ça serais gentil !

Merci d'avance !

[Dawn]

Salut !

C'est pour le Western et le Northern

Je crois que c'est :
-lyse de la cellule ou du tissu
-séparation
-transfert sur une membrane
-révélation

Voilou ! j'espère que c'est ça !

[Ilan]

Salut, alors moi je ne suis pas sur mais je dirais: Nothern blot= extraction , purification, electrophorese, le blotting( transfert sur membrane adaptée) Southern blot: pareil. Western blot: extaction, electrophorese, blotting

[Dawn]

Ah oui ça serait plutôt dit comme ça!

Je crois que c'est :
-lyse de la cellule ou du tissu --> extraction = lyse + purification
-séparation --> migration électrophorétique
-transfert sur une membrane --> blotting
-révélation

[BlackJesus]

Ok merci déjà et j'attend quand même la validation et explication de gabriel non pas que je n'ai pas confiance en vous ^^

[gabriel]

kikou
alors pour le Northern blot:
1.extraction; lyse de cellules avec du thiocyanate de guanidium et un inhibiteur (le beta mercaptoethanol) des ribonucleases pour eviter la degradation des arn qui sont fragiles, puis extraction phénol-chloroforme et enfin précipitation a l'ethanol froid plus sel
2.purification (facultatif): pour etudier que les ARNm, on les piege grace a une colonne recouverte d'olgo-dT qui se lie au poly-A des queues des ARNm
3.electrophorese; avec un gel agarose
4. le Blotting: transfert sur membrane
5.visualisation de l'ARN d'interet: grace a une sonde simple brin spécifique de l'arn d'interet; cette sonde peut etre marquée de 2 manieres (directe par radioactivité ou indirecte par un systeme de tag proteine et d'anticops secondaire couplé a une enzyme: le tout une fois couplé produit de la couleur ou de la lumiere

Le western Blot:
1.Ectraction; lyse des cellules puis extraction par un tampon particulier comme par exemple le tampon Tris (NB: pas le phenol chloroforme)
2.electrophorese; avec un gel d'acrylamide dénaturant
3.le blotting: transfer des proteine du gel sur une membrane par application d'un champ electrique perpendiculaire
4.visualisation de la protéine d'interet par un anticops spécifique couplé a une enzyme (phosphatase alcaline ou peroxydase): on ajoute le substrat de l'enzyme: reaction qui emet de la lumiere visualisé sous autoradio ou de la couleur visualisé directement

voili voilou
bizzz