ADN polymerase

[kitty]

bonjour !

j'ai une ptite question concernant l'ADN polymerase qu'on utilise pour la séquence, en fait un dit qu'on utilise une ADN polymerase "normale" (enfin on se parle pas de thermorésistante comme la Taq polymerase) mais je ne comprends pas pourquoi

ds la PCR on utilise une Taq car elle est résistante aux variations de températures qu'on lui fait subir et dans la séquence ya a peu près les memes variations donc pourquoi on n'utiliserait pas une Taq aussi dans la séquence ?

merci =)

[gabriel]

si c'est souvent la meme qui est utilisée: par exemple ds la methode de Sanger, avant l’élongation de l’amorce etait réalisée par le fragment de Klenow (une ADN polymérase I) et maintenant par des ADN polymérases thermostables comme la Taq, celles qui sont utilisées pour la PCR. la prof n'a juste pas spécifié je crois; avec les progres c mieux d'utiliser une polymerase thermoresistante ; par contre il faudra ajuster les temperatures d'elongation (60° pour une polymerase "normale" et 72° pour la Taq)
en effet le fragment de Klenow est le plus gros des 2 fragments protéiques formés par l'hydrolyse de l'ADN polymérase I d'Escherichia coli par une protéase :ce fragment etait bcp utilisé lors de la réplication de l'ADN pour synthétiser le brin complémentaire à partir d’un ADN simple brin et d’une amorce (lors de séqunçage). C'etait aussi l'élément à l'origine de la PCR, mais il est maintenant remplacé par des enzymes thermostables telles que la Taq polymérase.