FRET Intermoléculaire

[Paulinepome]

Bonjour divine Biocell

J'ai un petit soucis de compréhension lorsque le prof nous parle du FRET intermoléculaire :

Alors je me suis dit que la fluorescence augmentait dans la cellule (vu microscope) via la sonde à calcium. Donc le calcium est rentré dans la cellule par que la cellule a changé la conformation des molécules de ses membranes. Et comme Ca2+ est dans la cellule, CFP et YFP se rapprochent et forment un complexe
ou bien
Le calcium fixé par la calmoduline va induire son changement de conformation donc émission de fluorescence car rapprochement de CFP et YFP et si on calcule cette fluorescence on pourra en déduire la quantité de calcium.

Mais je suis pas du tout sûre de mon interprétation et surtout laquelle est la bonne ?
merci d'avance et bonne journée

[El Sangliero]

Holà Paulinepomme !

Alors je crois que ta seconde hypothèse est la bonne :

Toutes les cellules contiennent de la calmoduline, ici on a en plus fixé à une extrémité de la protéine du CFP et du YFP à l'autre extrémité
Quand le calcium entre dans la cellule, il va se fixer sur la calmoduline en modifiant ainsi sa conformation (la calmoduline etait toute droite et maintenant elle se plie), ce qui rapproche ses 2 extrémités et donc les 2 fluorochromes !
Les deux fluorochromes vont pouvoir interagir ensemble donc si on envoie un photon de longueur d'onde de 440nm sur le tout, celui-ci réagira avec le CFP qui relarguera une énergie qui réagira avec le YFP par conséquent on observera du jaune finalement
S'il n'y avait pas eu de calcium la calmoduline serait restée droite et on aurait observé du cyan et non du jaune.

Plus il y a de calcium plus on aura de fluorescence, donc calculer l'intensité de la fluorescence permet de connaitre la concentration de calcium

PS : perso en P1 j'avais bien compris le mécanisme grâce à ce poste de luciférase, si jamais ça peut t'aider
PPS : C'est bien de comprendre le fonctionnement mais ce qui interesse Gigi le S c'est surtout que tu comprennes le principe du FRET et la différence entre le FRET intra-moléculaire et inter-moléculaire !

J'espère que c'est claire pour toi sinon n'hésites pas à me le dire et je reformulerai !
Des bisous de la Biocell

[Paulinepome]

Helloooo
Merci beaucoup pour l'explication détaillée, c'est nickel pour moi ❤️