Système de sélection blanc / bleu

[~manon~]

Coucouu !

J'ai du mal à comprendre le fonctionnement du système de sélection blanc / bleu, c'est possible d'avoir plus d'explication.

Merci

[Stabilo'drey]

Salut salut !!

Le but de la sélection blanc / bleue est de différencier les bactéries ayant ingéré un plasmide sans insert de ceux ayant ingérer un plasmide avec insert c'est à dire un ADN recombinant.

Comment on fait ??

On utilise le gène de la B-Galacdosidase qui est présent sur le plasmide. La protéine produite en contact avec X-Gal donne une couleur bleu aux bactéries. Pour que le gène s'exprime, on met de l’IPTG dans notre culture.
Bon en gros faut principalement retenir que la B-galactosidase permet de colorer notre culture en bleue.

MAIS ce qui est important, c'est que le site polylinker (le site où vient se positionner l'insert) se trouve au milieu de ce gène. Ça veut dire que si un insert rentre dans le plasmide, c'est au niveau de l'emplacement du polylinker et donc l'insert va se trouver lui aussi en pleins milieu du gène. Et donc on va avoir un gène qui n'est plus continu, il va être couper en deux et donc il n'est plus fonctionnel.
L'insert empêche l'expression de la B-Galactosidase.

Donc si l'expression du gène n'est pas possible, on aura pas de protéine, et donc aucune coloration bleu, les colonies restent blanches.

PAS D'INSERT le gène est en 1 morceau, il peut s'exprimer, on a des protéines, on obtient une coloration BLEUE

INSERT le gène est couper en 2 car l'insert se place au milieu du gène, pas d'expression, pas de protéine, on obtient une coloration BLANCHE

Est ce que c'est bon pour toi ??

[~manon~]

Ouii merci !

[Xytilis]

Et coucou !

Je me permet de relancer le sujet parce que j'ai une petite incompréhension au niveau du X-Gal et de la B-Galactosidase. Tu dis :

On utilise le gène de la B-Galacdosidase qui est présent sur le plasmide. La protéine produite en contact avec X-Gal donne une couleur bleu aux bactéries. Pour que le gène s'exprime, on met de l’IPTG dans notre culture.
Bon en gros faut principalement retenir que la B-galactosidase permet de colorer notre culture en bleue.

Est-ce qu'il faut comprendre que ces 2 gènes donnent la couleur bleu ? Je croyais que puisque X-Gal était le composé hydrolysé par la B-Galactosidase, c'était la X-Gal qui allait rendre la bactérie bleue si le vecteur ne contenait pas d'insert... Elles interviennent en même temps du coup ? Je pense que c'est un peu confus dans ma tête haha

Est-ce qu'il serait possible d'avoir une petite explication ?

Merci et bonne soirée

[Stabilo'drey]

Oui pardon j'ai peut-être été un peu confuse dans ma réponse.

1 - On ajoute dans notre milieu de l'IPTG : ça va induire l'expression de la B-Galactosidase (ça veut dire qu'on va activer son expression, donc faire transcription puis traduction pour aboutir à une protéine)
2 - On a donc l'expression du gène de la B-Galactosidase qui nous donne donne la protéine correspondante
3 - On ajoute X-Gal dans notre culture : c'est un substrat incolore
4 - La protéine de la B-Galactosidase à comme effet de venir hydrolyser X-Gal
5 - X-Gal une fois hydrolysé n'est plus incolore mais bleu
6 - Nos bactéries sont donc elles aussi bleues

On comprends bien que tout cela n'est pas possible si le gène de le gène de la B-Galactosidase est coupé et que la protéine ne peut pas être formé !
Est ce que c'est plus clair cette fois ci ?

[Xytilis]

C'est super clair merciiiii ! Bonne journée