Différence PCR quantitative/pcr classique

[Valérie]

Bonjour,
Je ne comprends pas très bien quelle est la différence entre la pcr quantitative avec sybr green et la pcr classique avec l'agent intercalant comme le bromure d'etidium. Dans les deux, ça s'intercaler dans la double hélice? On a dans les deux cas une fluorescence émise lors de la synthèse de produits. Alors pourquoi dans un cas on peut déterminer la quantité d'and présent au début dans l'échantillon mais pas dans l'autre ?
Merci d'avance

[-Tagada-]

Coucou!!

La grosse différence c'est pas vraiment l'agent intercalant (meme si tu doit retenir ces exemples la et comment ils fonctionnent). La différence sera plutôt par rapport au moment ou on mesure la fluorescence.
PCR classique: à la fin des 40 cycles.
PCR quantitative: à la fin de chaque cycles.

Qu'est-ce que ca change?
Au bout de 40 cycles, la fluorescence a atteint un plateau= qu'il y ait 10 cycles de plus ou de moins, elle sera la meme, meme si la quantité d'ADN au départ est différente.
Le fait de la mesurer à chaque fin de cycles permet de tracer une courbe comme celle ci:

Cela nous permet ensuite de voir la quantité d'ADN que l'on a à chaque cycle. Plus on aura d'ADN, plus vite la courbe montera. Moins on en aura, plus elle mettra de temps a arriver a la fluorescence maximale. Mais quelque soit la quantité d'ADN au départ, au bout de 40 cycles toutes les courbes sont arrivées au plateau= ce n'est plus quantitatif.

Le but de la PCR= amplifier pour étudier
Le but de la PCR quantitative= mesurer la quantité d'ADN au départ (pour déterminer la chargea virale d'un virus par exemple, etc)

Voilà j'espère que m'a réponse t'as éclairé, sinon n'hésites pas

[Valérie]

Super merci beaucoup