Stratégies de clonage Ronéo 1

[CloéA]

Bonsoir/nuit

A la Page 15, pour les fragments d'ADN aux deux extrémités franches, on explique bien que le vecteur peut se refermer sur lui même (en présence de T4 DNA ligase) et qu'il faut des phosphatase pour empêcher ce phénomène et augmenter le nombre d'ADN recombinant, ...
Mais on peut avoir le même problème avec les vecteurs à deux extrémités cohésives non ? et de manière spontanée pour le coup ?

J'espère avoir été compréhensible
Merci bicoup d'avance

[Chob]

Salut !

C'est vrai qu'on pourrait se dire qu'il y a même + de risques que le vecteur se referme sur lui même quand on le digère avec une même enzyme à bouts cohésifs.
Mais enfait du coup, si on digère l'insert et le vecteur avec une même enzyme qui donnent des extrémités cohésives, ils vont tous les deux avoir des bouts simples brins sortants complémentaires,et je pense juste que l'hybridation entre eux se fait très facilement. (un brin d'ADN simple brin est instable et s'hybride avec son complémentaire dès qu'il peut).
C'est p'tetre plus "facile" pour le vecteur de trouver les complémentaires de ses extrémités sortantes sur les inserts (qui sont à proximité) que de devoir se "retourner sur lui même" (car un vecteur n'est pas très grand) pour rapprocher ses propres extrémités ..

M'enfin pour le coup j'ai pas trop d'explication, et la prof n'a pas précisé qu'il fallait aussi une déphosphorylation pour les extrémités cohésives donc je pense qu'on en a pas besoin car l'hybridation doit se faire facilement avec l'insert .

Désolé, pas top comme réponse ^^

[CloéA]

Ok Merci beaucoup !
C'est pas grave, c'était juste une info en plus