Clonage et sequençage

[Prout]

Bonjour

Alors voila , j'ai du mal à comprendre pourquoi , quand on veut amplifier les 2 allèles d'un même gène séparement , on est obligé de passer par le clonage moleculaire ? J'ai lu pas mal de post qui montraient la difference avec la PCR , en disant que la PCR amplifiait TOUT le gène sans faire la distinction des allèles ... Ca ok . Mais pourtant page 12 : " Une des difference avec la PCR c'est qu'avec le sequençage on ne met qu'une seule amorce (...) un des 2 brins n'est donc pas du tout utilisé " ---> Hormis ca , le sequençage suit les mêmes étapes que la PCR , donc pourquoi on ne peut pas amplifier seulement 1 allèle , en mettant qu'une seule amorce et sans mettre de ddNTPs ?
Je suis sure que y a un truc qui m'a totalement échappé mais vraiment là je bloque ...merci d'avance

[Chob]

Salut !

Le but final de tout cet enchaînement de techniques, c'est d'obtenir la comparaison des séquences entre l'allèle sain et l'allèle muté d'un gène, ou autrement dit de connaître les mutations qui affectent ton gène.
Dans ce que tu dis, (cas d'un individu hétérozygote), on pourrait amplifier directement et uniquement l'allèle qui nous intéresse (muté), ce qui voudrait dire qu'on aurait déjà reconnu l'allèle muté / qu'on aurait déjà distinguer les 2 allèles.
Or ça, tu ne peux pas le faire sans passer par le clonage justement. Les 2 allèles ne sont pas distinguables, vu que la seule chose qui les différencie c'est la ou les mutations potentielles que tu recherches !

Donc tu ne peux pas tout de suite séparer les 2 allèles, et si tu mets une seule amorce ça va rien changer : tu auras quand même l'amplification des 2 allèles (que l'allèle soit muté ou non, l'amorce est complémentaire à un fragment non-touché par les potentielles mutations / en amont). En utilisant qu'une seule amorce, en fin de compte, tu perdrais plus "du temps" qu'autre chose : tu aurais moins d’amplification pour le même nombre de cycle !


Bon.. ch'pas trop si c'est clair ..
Moi j'étais / je suis comme ça aussi : je préfère comprendre que d'apprendre bêtement, et en P1 je me posais pas mal de questions. Mais sincèrement, pour le partiel, je ne pense pas qu'il y aura des questions trop complexes qui vous feront réfléchir autant ^^
J'essaye vraiment de vous faire des DM type concours, et si tu arrives à les faire sans faute et que tu as compris les grands principes de toutes les techniques, ça devrait aller plutôt bien le jour J

[Prout]

Je suis désolée de répondre aussi tard mais j'avais oublié que j'avais posté En tout cas merci de ta réponse c'est plus clair maintenant , puis pour les petits détails je me contenterai d'apprendre par coeur