Coupure a bout franc et association spontanée

[Fab117]

Coucou tout le monde

Petite question par rapport aux coupures a bout franc et bout cohésif. En effet il est dit dans la ronéo que dans le cadre d'une coupure a bout franc , " il n'y a pas d'association spontanée possible (T4 ligase) " .

Quand on parle d'association spontanée c'est le fait que grace aux paire de base complémentaire qui éxiste sur l'autre brain on va pouvoir avoir liaison des 2 brins grace aux liaisons hydrogène c'est ça ? Même si cette liaison ne suffit pas.

Et je comprend pas le "( T4 ligase) ", ca veux dire que la T4 ligase va permettre cette association spontannée, ou qu'il faut qu'il y est eu association spontannée pour que la T4 ligase agisse ?

Merci de ton soutient Chob

[Chob]

Salut !

L'association spontanée est possible si tu as les bouts sortants, car oui ils sont complémentaires donc il va y avoir les liaisons hydrogènes entre les bases complémentaires qui vont se former.

Pour les coupures à bouts francs, tu n'as pas d'association spontanée car tu n'as pas les bouts simples brins qui vont pouvoir s'hybrider entre eux : dans le cas de coupure à bouts francs, la seule façon de relier l'insert au vecteur est par l'action de la T4 DNA ligase qui va former des liaisons phosphodiester. C'est pour ça qu'il y a écrit T4 entre parenthèse : en gros c'est la seule qui va pouvoir permettre une liaison entre vecteur et insert.

[Fab117]

D'accord et dans le cas ou on a des bouts sortants, il va y avoir association spontannée, mais la T4 DNA ligase ne va pas agir pour former les liaison phosphodiester ? Car les liaisons hydrogène c'est bien pour l'association spontannée mais c'est pas très stable, du coup il faut aussi qu'il y ait des liaisons covalentes pour fortifier tout ça non

Merci !!!

[Chob]

Non non dans les 2 cas tu auras la formation de liaison phosphodiester par la T4 !
En gros,
- si tu as des bouts cohésifs, tu pourras avoir une association spontanée (hybridation) mais aussi la formation des liaisons phosphodiester par la T4 (ligation). Look diapo 45
- si tu as des bouts francs, tu n'auras que la ligation par la t4 car tu ne peux pas avoir d'association spontanée

[Fab117]

En gros si on fait 2 tubes, 1 avec des bouts francs et l'autre avec des bouts cohésifs et qu'on met dans les 2 tubes de la T4 DNA ligase, on aura au final formation de liaison phosphodiester dans les 2 tubes sauf que ca sera plus rapide avec les bouts cohésifs étant donné que les bouts seront déja collé et que la T4 DNA ligase aura juste a former les liaisons phosphodiester c'est ça ?

[Chob]

En gros c'est ça ^^

[Fab117]

Super ! Merci a toi Chob