Tag Nt - Méthionine

[♦MC♦]

Je ne comprends pas réellement pourquoi on doit retirer AUG du gène d'intérêt (codant pour la 1ère méthionine de la protéine) si le TAG commence par une méthionine (d'ailleurs, est-ce que le Tag Nt commence toujours par une méthionine ? ).

Est-ce parce qu'on aura une synthèse séparée de la protéine d'intérêt et du tag ?

(et aussi : clonage moléculaire / d'expression ont bien lieu après amplif. par PCR ?)
Merci d'avance

[chelsea]

Alors en cours elle a dit qu'enlever le la méthionine de départ n'était pas obligé. C'est préférable
Moi j'ai compris que c'est pour que ta traduction commence au niveau de l'étiquette et pour que ta protéine puisse être fluo et qu'on puisse la suivre.
Je sais pas si j'ai répondu a ta question?

[-Manon]

Salut,

En fait si tu laisses la méthionine de l'ARN en plus d'avoir la méthionine de l'étiquette, y aura et traduction de la protéine à partir de l'étiquette ET traduction de la protéine à partir du l'ARN après l'étiquette, donnant des protéines sans étiquette, sauf que celles ci on s'en fout complet ! C'est pour ça que c'est préférable d'enlever la première méthionine de l'ARN, comme ça il y aura traduction seulement à partir de l'étiquette et toutes les protéines seront tagguées

Et pour ta deuxième question, il me semble, oui

[♦MC♦]

Ah, je vois ! C'est pour ça que c'est "préférable" ! Dans la mesure où la meth n'est pas enlevée, on aura tjrs des protéines tagguées, mais en proportion / rendement moindre

Nickel, merci chelsea & Manon

[-Manon]

Oui voilà je pense !
Mais attendons la confirmation de Chob quand même !

Et de rien !

[Chob]

Oui voilà. Quand vous voulez mettre un TAG en Nt de la protéine, il est préférable d'enlever l'ATG de l'ADNc.
On dit préférable parce qu'on aura quand même la traduction de la protéine de fusion, mais aussi de la protéine seule.

Donc oui c'est bien une question de rendement

Par contre attention, si vous voulez mettre le TAG en Ct de la protéine, il FAUDRA enlever le codon stop de l'ADNc !