PCR en temps réel et méthode Taqman

[Clinch]

Salut

C'était pour demander car cette méthode m'est encore floue, on utilise la méthode taqman pour voir combien y a de région qui correspondent au gène spécifique que l'on cherche dans l'ADN du patient grâce à la fluorescence émise mais est ce qu'il le compare par rapport à un individu normale pour savoir si il y a une expression supplémentaire de gènes du au fait qu'il y ait plus de copie qu'en temps normale ?

Et je ne comprends pas le but d'être quantitatif à moins qu'il compare plusieurs courbes de personnes entre elles...

J'espere que j'ai été à peu prés clair :p. Si quelqu'un peut m'expliquer


Merci et bonne journée

[Chob]

Salut !

on utilise la méthode taqman pour voir combien y a de région qui correspondent au gène spécifique que l'on cherche dans l'ADN du patient grâce à la fluorescence émise

J'ai regardé les applications de la sonde Taqman et enfait elle servirait plutot à repérer si on a un allèle muté ou un allèle sauvage. (Peut être qu'il y a d'autres applications .. j'suis pas trop calée sur cette partie là, c'est nouveau cette année et j'ai pas vraiment le temps de me plonger dans des recherches approfondies)

Par exemple, pour un gène, on connait une mutation possible.
On va utiliser une sonde taqman complémentaire à la séquence sauvage et une sonde taqman complémentaire à la séquence muté (ce sont 2sondes "allèles-spécifiques") et les deux vont être couplés à des rapporteurs donnant 2 couleurs de fluorescences différentes.
Du coup selon la couleur, tu peut identifier l'allèle sain et l'allèle muté.

Et après c'est quand même une méthode PCR, donc le but c'est d'amplifier tes fragments.
Puis plus tu fais de cycles, plus il y aura de sondes qui se seront hybridées et qui auront été dégradé, et plus tu auras un signal de fluorescence important. C'est pour ça qu'on parle de quantitatif !

[Clinch]

et donc à la fin en comparant les deux courbes, selon la quantité de fluorescence on peut en déduire si l'allèle est plus expriméé ou pas par rapport à une cellule normale c'est ça ?