Hoesht

[Loww]

Bonjour !

J'aurais besoin d'une confirmation/réponse, sur rien de bien compliqué mais qui me gène ^^

1) Pour que l'Hoesht puisse se fixer sur les bases A et T, a-t-on préalablement besoin de "casser" (ou dénaturer par chauffage) la double hélice ?
Je pense que oui sinon, impossibilité de se fixer ..

2) Si non, Alors comment se fait-il que l'hétérochromatine soit plus marquée que l'euchromatine dans l'expérience de fluorescence induite (ronéo 2 p.12) ?

3) Si non, comment se fait-il que dans l'expérience de la mort cellulaire (ronéo 12 p.25), les cellules vivantes ne soient pas positives à l'Hoesht ?


J'espère avoir été claire Merci d'avance !

[Bittoucell]

Hoescht et DAPI se fixent aux bases A et T de l'ADN uniquement. Sans besoin qu'on traite les chromosomes. Cette coloration marque plus puissamment l'hétérochromatine simplement parce qu'elle est plus condensée donc a plus de bases AT par mm²

Par contre pour tes exemple de page de ronéo, je trouve pas du tout ce dont tu parles dessus... Tu parles de la nouvelle ronéo ou l'ancienne ?

Mais sache que l'Hoescht passe la membrane cellulaire spontanément.

[Loww]

Salut ! déjà merci pour ta réponse !

Je parle de la nouvelle ronéo, la ronéo 12p.25 sur la mort cellulaire, avec les graphiques et les petits points quand on traite avec l'iodure de prop/Hoesht.

Les petits points situés en bas à gauche sont sensés être positifs à l'Hoesht puisque l'Hoesht passe spontanément et qu'on n'a pas besoin de casser les liaison pour qu'il se fixe ... Or là, on a des cellules qui ne sont positives à rien, comment ça se fait ? :/

J'ai été claire ou pas du tout ?

[Bittoucell]

Au contraire, la cellule, quel que soit son état (nécrotique, apoptotique ou normale) est positive à l'Hoescht... Tu es sûr d'avoir bien compris ce graph ? Je te conseille de bien revoir le pdf de la séance de révision qui explique cela

[Loww]

Benh ... oui j'ai compris ...

Mais sur le graph de la ronéo, les cellules qui sont en bas à gauche elles sont bien positives à rien ?!

[yoctoto]

Salut reine des moustache ^^
Toutes les Cellules sont positives au Hoestch après faut que tu regardes quels cellules sont positives/négatives au iodure de propium!
Si tu as un test positifs pour le iodure de propium=nécrotique sinon c'est apoptotique.
Après je vois ce que tu veux dire avec Hoescht y'en a un peu plus dans les cellules apoptotiques,nécrotiques surement parce que dans la cellules apoptotiques tu as la fragmentation de l'ADN= plus grande quantité de Hoestch réagit vu que plus accessible et pour les nécrotiques c'est pareil parce que la cellules exploses!
Donc en gros tu auras un peu plus de Hoescht dans les cellules nécrotiques/apoptotiques.
Voilà j'espère n'avoir pas dit de bêtises!
PS:J'aime quand ce CLAQUE!!!!!

[Loww]

Hey Toto,

Oui mais sur le schéma elles sont pas positives à l'Hoescht Elles le sont pas plus qu'elles ne le sont à l'iodure de Prop en tout cas ... c'est ça que je ne comprends pas


PS : vas voir mon post en bioch !!

[yoctoto]

Bah le iodure de propium ne rentre pas dans la cellule, il faut perméabilisation donc les normales et apoptotique sont négatives.Mais Hoescht, rentre directement dans la cellules donc ce sera positif partout Mais surtout les bases A-T seront plus accessible donc "plus positives" dans les cellules apoptotiques (puisque fragmentation) et nécrotique(puisque explosion). Enfin je raisonne comme ca après c'est peu être faux ^^.
PS:je commenterais le post à 10h30 quand je ferais de la biochimie

[Loww]

Mais oui je sais tout ca ... mais pour moi les cellules du bas ne sont pas positives, nià l'Hoesht ni àl'iodure de Prop. Alors soit j'analyse mal le graph et elles sont positives, soit bah je jette l'éponge j'en ai marre ^^

J'apprends et puis c'est tout !

Merci !

[yuki06]

je vois ce que tu veux dire j'ai le même pb avec ce graphe.

[Choubi]

Je comprend ton problème, après ça s'exprime un peu quand même mais retiens que Hoescht peut passer les membranes, ça s'est important ! Je vais chercher demain quand j'aurai la tête un peu plus reposée

[Loww]

Oh merci vous être trop gentils !

Après c'est vrai que peut-être qu'elles sont "un peu positives" même si elles sont en bas ? Peut être que je chipote aussi
Ou alors ce n'est pas la même échelle pour l'iodure de Prop et l'Hoesht, donc elles sont positives à l'Hoesht par rapport à l'axe des ordonnées, mais pas positives à l'iodure de prop, qui n'a pas la "même échelle de positivité" sur l'axe des abscisses ?

Enfin merci en tout cas, à vous deux, rien que le fait que vous ayez compris mon problème ça me rassure

A demain alors !

[yuki06]

c'est pas trop l'échelle qui me perturbe c'est plutot la notion de présence ou d'absence de marquage normalement. le truc c'est que sur l'image hoescht entoure QUE le cadran supérieur gauche. après c'est vrai c'est peut etre poru simplifié chai pa

[Azula]

Même prolème