Coucou !!
Si on est dans le cas de l'achondroplasie, on a bien :
1) Extraction de l'ADN ( sinon on peut pas travailler
)
2) Amplification par PCR --> on amplifie les fragments d'ADN effectivement pour en avoir une quantité suffisante pour travailler dessus par la suite et ces fragments sont de 164 paires de bases et entourent la position de la mutation
3) Vérification par gel d'électrophorèse : on vérifie que nos fragments soient de la bonne taille donc 164 pb
4) Digestion enzymatique : là c'est un peu l'étape la plus importante puisqu'on va savoir si il y a la mutation ou pas et de laquelle il s'agit. On fait deux digestions différentes ( dans des tubes différents ) avec les deux enzymes, BfmI ( qui coupe pour G>A ) et HpaII ( qui coupe pour G>C ). Une fois qu'on a fait ça on veut vérifier si les enzymes ont coupé ou pas et c'est là qu'intervient la deuxième électrophorèse.
Il va y en voir deux ( une pour chaque enzyme donc 2 gels différents ) et avec la migration de l'ADN on pourra observer la taille des fragments. Si on a des fragments de 164pb l'enzyme n'a pas coupé ( donc pas de mutation ) et si on a des fragments de 109 et 55 pb alors l'enzyme a coupé l'ADN et la mutation est présente.
5) Vérification par séquençage de Sanger : pas à connaitre, il faut juste savoir qu'on vérifie par une seconde technique ( et ici c'est pour connaitre exactement la séquence de nucléotide )
J'espère avoir été assez claire, si tu n'as pas compris ou que tu as une autre question surtout n'hésite pas !!!
