Séquencage

[Einat22]

Coucou, dans le cour de génétique sur les personnes porteur de la maladie de la wolframine, je ne comprend pas pourquoi lors du sequencage automatisé sur les regions intronique (dans la deuxième partie) il est dit que les morceaux sont de la memes tailles et sortent au memes moment mais avec ddntps différent .

Sachant que si on a une mutation intronique chez la mère les fragments ne devraient pas être de la memes tailles mais plus lourd chez la mère .


Merci

[Robisome]

Coucou!

Attetion à ne pas confondre les étapes

Si tu suis étape par étape :
1. on prend notre ARNm après épissage avec un allèle contenant la mutation et l'autre sain
2. on crée un ADN complementaire pour pouvoir l'amplifier et le séquencer
3. quand on fait un séquençage, on a bien les deux allèles confondus attention comme tu dis, dans ce cas la mutation a crée un ARNm plus long, donc plus lourd, en rajoutant des nucléotides quelque part au milieu. Jusque là c'est bon ?

Comment ça va se présenter lors du séquençage ? en fait cette phrase "On a donc des morceaux de mêmes tailles qui sortent au même moment de notre séquenceur pour passer devant la caméra, mais qui ont des DDNTPs de couleurs différentes" de la ronéo veut simplement dire que pour un endroit donné, à partir où la mutation commence, donc où il y a des nucléotides en plus, il y a aura une superposition de pics différents. On arrivera plus à lire les couleurs (qui indiquent les DDNTPs incorporés) car ils seront décalés à cause du rajout des nucléotides sur un seul allèle ++ (car maman hétérozygote pour la mutation)

C'est à cause de cette embrouille qu'il faudra ensuite faire un clonage moléculaire +

Donc ici "de meme taille" ne se refère pas aux deux ARNm des allèles muté et sain.

Est-ce que j'ai réussi à être assez claire ? sinon n'hésite vraiment pas c'est important à comprendre ! j'essaierai de te re-éxpliquer avec d'autres mots

[Einat22]

Ouiii merciii