Méthode Sanger

[arth]

Salut,

Je ne comprends pas pourquoi, sur l'électrophorèse, on doit lire de bas en haut et prendre la séquence complémentaire. Parce que si on fait ça, on aura bien la séquence d'origine mais dans le sens 3' vers 5'.
Donc est-ce qu'on veut la séquence d'origine dans le sens 3' vers 5' ou bien il y a une erreur ?

Merci

[Robisome]

Coucou !

Désolée pour le délai de réponse, j'avais zappé ta question

Attention : on commence à lire de bas en haut l'électrophorèse tout simplement parce qu'en bas ont migré les fragments les plus légers, les plus petits, donc on retrouve le début de la séquence d'ADN qu'on veut connaitre.

si un DDNTP s'est inséré direct sur un fragment et a ainsi bloqué la synthèse successive, on retrouve un fragment avec un seul nucléotide, donc tout petit, qui a migré tout loin. Ce sera le premier nucléotide de la séquence d'ADN d'intérêt. En fonction du tube (A,C,T,G) ou de la couleur (méthode automatisée) on identifie de quel nucléotide il s'agit. On fait la même avec le 2e fragment plus petit et ainsi de suite... Plus tard la synthèse est bloquée par le DDNTP, plus loin dans le fragment d'ADN se trouve le nucléotide en question.
(rappel : l'intéret du DDNTP est justement de bloquer la synthèse pour déterminer la position des nucléotides à travers des fragments de différentes tailles)
Les fragment les plus longs migrent moins loin dans l'électrophorèse, car plus lourds, et se retrouvent en haut.
Si tu comprends ce mécanisme de séquençage tu comprends pourquoi il faut partir du bas.

Donc c'est bien dans le sens 5'-3' +++

Une fois qu'on a fait ça, on doit donner la séquence complémentaire de la séquence trouvée +++ pour retrouver le brin d'ADN d'origine.

Est-ce que c'est plus clair ?