Dénaturation et lavage Illumina

[Nicolassitude]

Coucou la génétique

J'ai du mal avec la technique de dénaturation et lavage pour Illumina, es ce que je pourrai avoir un petit récap
(meilleurs matière et tuteur donc logique j'aurai une réponse de qualité)

[Généthilde]

Coucouuuu

Sur la lame de verre va venir se fixer au départ un brin d'ADN en s'hybridant par complémentarité de base avec un primer déjà fixée sur la lame et ensuite toujours par complémentarité de base il va y avoir synthèse du brin complémentaire (toujours de 5' et 3' )
Une fois que ton brin est synthétisé vient l'étape de dénaturation et lavage et en gros on dénature les brins complémentaires donc avec rupture des liaisons hydrogène. Une fois que les brins ne sont plus "attaché" le brin qui s'est posé au tout début va être enlevé par lavage --> le but est de ne garder qur la lame que le brin qu'on vient de synthétisé et qui est fixé à la lame grâce au primer de base

Je sais que ce sont des notions un peu compliquées au début mais est ce que c'est bon pout toi ?

[Nicolassitude]

Ha d'accord donc si j'ai bien compris on garde le brin qui est formé par complémentarité à celui qui était fixé sur la lame de verre (les primers) puis les primers sont dégradés ?
Et donc après cette étape on refait une réplication par complémentarité des brins sur ceux qu'on a par complémentarité des primers pour obtenir les brins sens qui nous intéresse et ainsi dégradé les brins complémentaires des primers du début. Es ce que c'est bien cela ?

[Généthilde]

Coucou
Oui le brin formé par complémentarité au début est bien fixé à la lame mais on ne dégrade pas les primers (puisqu'ils sont fixés à la lame) mais on enlève le brin qu'on a mis au départ donc il ne reste que celui qui vient d'être formé.
Et après ce brin forme un pont pour aller s'associer par complémentarité de bases avec un autre primer de la lame puis on resynthétise ce qui forme bien le brin sens ( qui est donc exactement le même que celui déposé initialement sur la lame )

C'est bon pour toi ?

[Nicolassitude]

Oui c'est bon merci !
Je me suis pas mal embrouillé sur cette partie mais j'y suis arrivé !
Bon après Thermofischer c'est un autre level avec l'émulsion

[Généthilde]

Si tu as des questions sur Thermofisher n'hésites pas, je sais que c'est une partie un peu dur mais mais en général ce ne sont pas les QCM les plus compliqués