Différence entre PCR classique et réel

[mimitol]

Bonsoir
J’aimerais savoir si la différence entre PCR classique et PCR réel et juste le faite qu’on dans la réelle on utilise la SYBR Green?
Et la différence avec la PCR quantitative ?
Merci

[Paulysosome]

Bonjouuuurrrrr

Alors tout d'abord la PCR en temps réel et la PCR quantitative c'est LA MEME CHOSE.

Maintenant, deuxième point un peu plus complexe : la différence entre une PCR classique et la PCR quantitative ....

La PCR classique c'est tout simplement une méthode pour amplifier un fragment d'ADN. Pour résumé c'est une photocopieuse. Tu prends un fragment d'ADN et tu le dupliques en grande quantité.
Donc le but de la PCR classique est d'AMPLIFIER une séquence d'ADN.

Le but de la PCR quantitative (= en temps réel ) est différent.

Cette technique va également amplifier un fragment d'ADN. Mais l'intérêt n'est pas là ... (le suspense est à son comble ...)

On l'utilise pour connaitre la quantité d'ADN génomique présente initialement dans un tube.

Prenons l'exemple du Covid... (ça faisait longtemps je sais ).

Ces dernières années nous avons réalisés de NOMMBBRRREEEUUUUXXXXX tests PCR... (une pensée à nos narines ..... ). Lors d'un test nous allons déterminer si il y a un virus ou non en mesurant sa quantité. Et pour cela on utilise .... la PCR EN TEMPS REEL.

Donc une PCR amplifie et l'autre amplifie pour mesurer une quantité.

J'espère que c'est plus clair,

Kissseeessss sur tes fragments d'ADN amplifiés

[mimitol]

D’abord merci beaucoup pour cette réponse!
Si j’ai bien compris, c’est en amplifiant le fragment d’ADN qu’on retrouvera les gènes de Covid? Mais du coup pour savoir que c’est dans ce fragment qu’en retrouvera ces gènes il faut passer par la digestion enzymatique?
En effet c’est ça qui me pose problème c’est comment arriver à interpréter les résultats à partir d’un fragment d’ADN qui ne contient pas la totalité des gènes qu’on a.

[Paulysosome]

Malheureusement, je ne suis pas experte en virologie (je sais, c'est décevant... ) mais je pense qu’ils cherchent de l’ADN viral dans le prélèvement.

Je te propose de prendre l'exemple de l'achondroplasie pour comprendre le raisonnement en génétique.

Tu es un superbe médecin qui prend en charge une femme enceinte. Lors de l'échographie il y a des signes d'appels (fémurs courts...)

Puisque tu te souviens de tes merveilleux cours de Génétique de P1 (que tu adorais plus que tout au monde ) tu suspectes une achondroplasie.

Tu réalises un prélèvement d'ADN.

Et là il faut se souvenir que l'achondroplasie est une mutation qui est toujours au même endroit donc on sait où chercher (c'est toujours le même gène, le même codon, le même nucléotide).

Donc à partir de là tu amplifies avec la PCR que ce petit morceau d'ADN. En effet, tu ne vas amplifier le gène qui code pour la couleur des yeux alors que tu sais que la mutation est sur un tout autre gène.

Un fois que tu as terminé ta PCR (donc tu as amplifié ton fragment), tu vérifies avec la digestion enzymatique si la mutation est présente ou non.

Si il y a une mutation les enzymes de restrictions couperont le fragment par contre si le fragment est sain il ne sera pas coupé.

Néanmoins, dans certaines pathologies les mutations ne sont pas précisément localisées donc dans ces cas là il faut séquencer TOUT le génome (avec le NGS).

Si c'est toujours pas clair n'hésite SURTOUTpas !! Je t'expliquerai en faisant ma plus belle chorégraphie !! (sinon tu peux assister à la soirée Discord lundi 25 septembre de 20 h à 21h, peut être que d'entendre ma douce voix t'aidera )

Des bisous

[mimitol]

Avec autant d’amour de la part de la biomol/génétique je ne peux qu’aimer cette matière
Merci beaucoup pour cette reponse