PacificBlue Tut 1 QCM 6

[tm803237]

Salut,
j'ai pas compris d'où ça sortait le "PacificBlue".. le prof n'en a pas parlé en cours.. si?
il absorbe quelle couleur et émet dans laquelle?
en fait je n'ai pas bien compris comment on devait raisonner pour résoudre ce type de QCM.. ?

[jenny06]

Hey!

Moi aussi j'aimerai savoir quel type de raisonnement il faut avoir dans sa tête lorsqu'on a ce genre de QCM ?? Merci

[toche]

Alors déjà le PacificBlue est un fluorochrome artificiel exactement comme la rhodamine mais bleu . À vrai dire, on se moque totalement de ses spectres d'émission et d'absorption pour les besoins de ce genre de qcm.

Quant à la résolution du qcm on va y aller pas à pas :
Le principe de la double immunofluorescence indirecte est de visualiser deux protéines grace à deux fluorochromes de couleurs différentes par l'intermédiaire d'anticorps.


Déjà, réfléchissons pour un MARQUAGE SIMPLE (marquage d'une seule protéine X) on a besoin de :
- un anticorps primaire créé chez une espece donnée (AC de lapin par exemple) dirigé contre ma protéine X
- un anticorps secondaire issu d'une autre espèce (la souris par exemple) dirigé contre l'anticorps primaire et couplé à un fluorochrome.

Une petite image pour illuster :


Pourquoi de deux espèces différentes? Parce que si on avait les AC primaires et secondaires issus de la même espèce, il n'y aurait pas d'ordre dans le marquage: les anticorps secondaires de lapin et dirigés contre les anticorps de lapin se colleraient n'importe comment entre eux et créeraient un brouillage de l'image en faisant des tas partout et pas uniquement sur les AC primaires.

Dans ces conditions, on aura donc l'enchainement:
X <-> Ac de lapin anti-protX <-> AC de souris anti-AC de lapin couplé à la Rhodamine (par exemple)



Maintenant pour un DOUBLE MARQUAGE on aura besoin de deux ''lots d'anticorps'' comme on vient de voir MAIS:

- les deux anticorps primaires doivent avoir des origines différentes.
et les deux anticorps secondaires doivent avoir des origines différentes de celles des anticorps primaires et de l'autre anticorps secondaire.
Pour les mêmes raisons que tout à l'heure: si les deux anticorps secondaires peuvent se fixer sur les deux anticorps primaires, bonjour la spécificité du marquage...
=> en pratique, les 4 espèces doient être différentes.

- Les deux fluorochromes doivent être différents (on comprendra le problème si ils sont pareils, pas de différenciation des deux marquages)




J'espère que ça ira, n'hésitez pas à venir me voir au prochain tutorat si ça ne va toujours pas, ça marche toujours mille fois mieux avec des schémas...
Bisous les loulous!

[jenny06]

Okay merci bcp c'est plus clair ds ma tête mtn =)

Donc l'item 5 est faux pk ils st les 2 couplés à la rhodamine c'est ça? Il aurait fallu un couplage pour chaque AC c'est bien ça ??

[toche]

Exact! tes AC sont parfaits, c'est juste que tu aura la même couleur sur ton image de microscopie donc tu n;as pas un double marquage (pas de différenciation des deux protéines)

Travaille bien,
V.

[tm803237]

Merci beaucoup!
je pouvais pas en attendre plus..!