Test blanc / bleu

[BABE]

Salut

Voilà je ne comprends pas un truc certainement tout bête...
Le test blanc/bleu et je ne comprends pas pourquoi lorsque l’insert est intégré, le gène ne s’exprime pas et lorsque l’insert n’est pas intégré, le gène s’exprime !

Merci d'avance

[Lady Vic]

Coucou

Alors déjà le principe du test à la Béta-Galactosidase c'est d'introduire l'insert dans un plasmide au milieu du gène qui code pour la BGal:
Si l'insert a été intégré, il va y avoir modification de la lecture du gène codant pour la BGal et donc il n'y aura pas de synthèse de cette protéine.

Pour cela on a besoin :
- IPTG = induit l'expression de la BGal
- X-Gal = substrat INCOLORE de la BGal qui lui donne une couleur BLEU quand elle l'hydrolyse

Si il y a eu INSERTION de l'insert : Le gène codant pour la BGal sera NON-FONCTIONNEL car coupé en 2 par l'insert -> pas de production de la protéine même en présence d'IPTG -> PAS d'utilisation du substrat X-Gal -> colonies BLANCHES

Si il n'y a pas eu insertion de l'insert (vecteur VIDE) : Le gène codant pour la B-Gal est FONCTIONNEL -> synthèse de la protéine possible par IPTG -> utilisation de son SUBSTRAT X-Gal -> HYDROLYSE de X-Gal -> colonies BLEUES

Voili, voilou

J'espère que c'est + clair

Bonne journée

[BABE]

Ah mais complétement plus clair !!!

Merci beaucoup !