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par **Lucie83** » 26 Mar 2014, 14:24

Bonjours !!!

je crois que j'ai un problème de compréhension
Dans la première ronéo pour le séquençage ya besoin de 1 primer ( et la prof a l'air d'insister dessus !! ) alors que dans la deuxieme ronéo il en faut 2

pouquoi cette différence ??????

par **Lucie83** » 26 Mar 2014, 14:32

je crois que je viens de comprendre un petit truc en plus mais c'est toujours pas très clair !!!

dans la deuxième ronéo on parle de séquençage dans l'exemple de la maladie de wolfram du coup on veut trouver la différence entre la PCR où on s'interresse qu'aux EXONS et celle on on a les INTRONS et les EXONS ( celle de la mère )
Du coup on prend 1 primer qui va dans un sens et un autre dans l'autre sans pour encadrer la partie intron ( je sais pas si c'est claire ma question )

déja estce que c'est juste

et si jamais le profs demande que pour le séquençage on a besoin de 1 primer on met vrai ????

( Je suis désolée je sais que c'est brouillon mais je crois que c'est parceque dans ma tête c'est ... comment dire :sick:

)

merci en tous cas :p

par **Mister Orrange** » 26 Mar 2014, 23:57

Je ne vois pas ou tu vois que l'on fait un séquençage avec deux amorces dans la ronéo 2 :s
Tu me diras où sait.

Mais de ce que j'ai compris du cours, je pense que ce que tu confond c'est :

Amplification : on utilise 2 amorces qui entourent la séquence d'ADN à amplifier.

Séquençage : on utilise une amorce et on laisse la polymérisation se faire et elle va s'arrêter toute seule après avoir fixé une ddNTP.

par **Kardajian** » 27 Mar 2014, 11:20

Salut !

Je confirme ce que dit Sami ^^

Il faut bien distinguer le séquençage de la PCR

I. La PCR

Le but est d'amplifier un fragment d'ADN, le plus souvent correspondant à un gène ou une portion de gène ^^
Pour pouvoir amplifier spécifiquement cette portion d'ADN, il va d'abord falloir le délimité, d'où l’intérêt d'utiliser 2 primers :

- Un primer en amont de la portion d'ADN, pour savoir où commencer
- Un primer en aval de la portion d'ADN, pour savoir où s'arrêter

La portion comprise entre les deux primers sera amplifiée

II. Le séquençage

Au contraire pour le séquençage (en prenant la méthode de référence, cet à dire la méthode de Sanger) ce qu'on veut c'est connaitre la séquence d'une portion d'ADN (qui l'eut cru ^^)

Mais cette fois ci, un seul primer suffit : en amont de la portion d'ADN à séquencer pour lui dire où commencer.
Pas besoin de lui dire où s'arréter car de toute manière, l'ADN polyérase va intégrer aléatoirement des ddNTP, ce qui stoppera l'élongation

Tu vois un peu mieux le truc ?