Méthode sanger

[Chuckyyy]

Bonjour

Je suis désolé mais j'ai toujours eu du mal à comprendre l'intérêt de bloquer l'élongation et pourquoi on ne synthétiserais pas l'ensemble du brin d'un coup au lieu d'avoir des millier de fragment , du coup je ne comprend pas le fonctionnement de cette machine , si quelqu'un pourrait m'expliquer ça serait cool

[Lady Vic]

Coucou

Bon alors, dans un tube on a le brin à séquencer, des dNTP, des ddNTP et la polymérase. On va faire plusieurs cycles jusqu'à obtention de toutes les tailles de brins possibles avec un marquage pour chacun à leur extrémité -> ça correspond à la couleur du fluorochrome du ddNTP.

Ensuite, on va séparer tous ces fragments par ordre de taille par migration dans un champ électrophorétique auquel on va coupler un système qui va lire les couleurs des fluorochromes des ddNTP.

On va d'abord lire les + petites molécules : ce sont celles qui migrent le + loin et celles qui apparaissent en premier.
Puis on va remonter par ordre de taille pour à la fin lire l'intégralité de la séquence d'ADN.

Donc en gros, la + petite molécule correspond au 1er nucléotide de la région à séquencer( si on détecte de la couleur bleu, on en déduit que le premier nucléotide est C), la deuxième molécule la plus petite correspond aux 2 premiers nucléotides de la région à séquencer(si on détecte du rouge, on en déduit que le second nucléotide est un T) ... et la + grosse molécule correspond à la région entière

Voili, voilou

J'espère que c'est plus clair

Bonne soirée et bon courage

[Chuckyyy]

Merci bonne journée